食源性致病微生物检测的扩增引物和液相芯片试剂盒

摘要

本发明公开了一种食源性致病微生物检测的扩增引物和液相芯片试剂盒，所述试剂盒包括针对待检测微生物基因设计的扩增引物对，所述待检测微生物的正向引物和反向引物包括有以下至少一对：针对阪崎肠杆菌的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、针对单核细胞增生性李斯特氏菌的SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、针对大肠埃希氏菌O157的SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、针对金黄色葡萄球菌的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、针对志贺氏菌的SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10、针对沙门氏菌SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、针对副溶血性弧菌的SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14；和包被有Anti-tag序列的磁珠。本发明设计的扩增引物具有非常好的特异性，能准确区分和特异性扩增各种目标检测致病微生物相应的基因片段。而且，本发明设计的检测试剂盒，其灵敏度得到极大提高，从实验结果可知，七种食源性致病微生物的检测灵敏度可达10CFU/mL。

主权项

一种食源性致病微生物检测液相芯片试剂盒，其特征在于，包括有：(A)针对待检测微生物基因设计的扩增引物对，每对扩增引物包括有扩增引物F1和扩增引物R1，所述扩增引物F1从5’端至3’端依次由tag序列，间隔臂，每种相应待检测微生物的正向引物组成，所述扩增引物R1为5’端带有生物素标记的、对应的待检测微生物的反向引物；所述tag序列选自SEQ ID NO.17‑SEQ ID NO.28；所述间隔臂选自C3Spacer、Spacer9、dSpacer、3’C6Spacer、Spacer12、Spacer18或PC Spacer中的任一种；所述待检测微生物的正向引物和反向引物包括有以下至少一对：针对阪崎肠杆菌的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、针对单核细胞增生性李斯特氏菌的SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、针对大肠埃希氏菌O157的SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、针对金黄色葡萄球菌的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、针对志贺氏菌的SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10、针对沙门氏菌SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、针对副溶血性弧菌的SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14；(B)包被有Anti‑tag序列的磁珠，所述Anti‑tag序列与相应的待检测微生物的tag序列互补配对，所述Anti‑tag序列选自SEQ ID NO.29‑SEQ ID NO.40；针对不同待检测微生物的磁珠具有不同的荧光编码。