基于磁性分离和量子点标记的人呼吸道合胞病毒快速检测方法和试剂盒

摘要

本发明提供了一种基于磁性分离和量子点标记的检测人呼吸道合胞病毒抗原的方法，该方法包括（1）制备抗人呼吸道合胞病毒免疫纳米磁珠；（2）制备量子点标记的抗人呼吸道合胞病毒纳米探针；（3）将待检样品用样品处理液溶解后，向溶解液中加入抗人呼吸道合胞病毒免疫纳米磁珠，充分混合及反应后进行磁分离，以PBST缓冲液洗涤，向得到的沉淀物中加入量子点标记的抗人呼吸道合胞病毒纳米探针，反应后磁分离，以PBST缓冲液洗涤后，使用荧光酶标仪检测荧光值。本发明建立了一套准确、快速、高灵敏度的检测人呼吸道合胞病毒的方法，其在人呼吸道合胞病毒的临床诊断、病原学鉴别、流行病学调查等方面具有很高的实用价值。

主权项

一种基于磁性分离和量子点标记的检测人呼吸道合胞病毒抗原的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1)兔抗人呼吸道合胞病毒NP蛋白多克隆抗体的制备；2)鼠抗人呼吸道合胞病毒NP蛋白多克隆抗体的制备；3)将步骤1)制备得到的兔抗人呼吸道合胞病毒NP蛋白多克隆抗体与纳米磁珠通过共价偶联，制备抗人呼吸道合胞病毒免疫纳米磁珠；4)将步骤2)制备得到的鼠抗人呼吸道合胞病毒NP蛋白多克隆抗体与纳米量子点通过共价偶联，制备量子点标记的抗人呼吸道合胞病毒纳米探针；5)取人呼吸道分泌物样本，用样品处理液溶解后，加入步骤3)制备得到的抗人呼吸道合胞病毒免疫纳米磁珠，充分混合，反应10‑45min后进行磁分离，以PBST缓冲液(8g/L NaCL，0.2g/L KCl，0.24g/L KH₂PO₄，1.44g/L Na₂HPO₄，0.3g/L NaN₃，0.5ml/L Tween‑20；pH7.4)洗涤2遍后，向磁分离得到的沉淀物中加入步骤4)制备得到的量子点标记的抗人呼吸道合胞病毒纳米探针，反应10‑45min后进行磁分离，以PBST缓冲液洗涤2遍后，使用荧光酶标仪读取荧光值；所述样品处理液中各组分含量分别为8g/L NaCL，0.2g/L KCl，0.24g/L KH₂PO₄，1.44g/L Na₂HPO₄，0.3g/L NaN₃，5ml/L Nonidet P‑40，5ml/L Triton X‑100，所述样品处理液的pH＝7.4；6)根据步骤1)‑步骤5)的方法分别检测四份经临床确定为人呼吸道合胞病毒阴性的人群的呼吸道分泌物样品，读取荧光值；所述人呼吸道合胞病毒阴性的人群的呼吸道分泌物样品简称人呼吸道合胞病毒阴性对照样品；所述四份人呼吸道合胞病毒阴性对照样品的荧光值的平均值与3倍标准差之和即为CUT‑OFF值；若步骤5)中人呼吸道分泌物样本的检测荧光值大于CUT‑OFF值，则判断为人呼吸道分泌物样本中人呼吸道合胞病毒抗原为阳性；若步骤5)中人呼吸道分泌物样本的检测荧光值小于CUT‑OFF值，则判断为人呼吸道分泌物样本中人呼吸道合胞病毒抗原为阴性。