一种葡萄酒中多酚物质的高效液相色谱分析方法

摘要

本发明公开一种葡萄酒中多酚物质的高效液相色谱分析方法，即首先取待测葡萄酒经过滤、前处理得待测样品，利用HPLC对其进行洗脱得待测样品中多酚的HPLC指纹图谱；配制单一多酚标准品溶液和一系列浓度梯度的外混合多酚标准品溶液，经过滤后在相同色谱条件下进行分析，得单一多酚标准品的HPLC指纹图谱的保留时间与待测样品中多酚的HPLC指纹图谱的保留时间进行对照，对待测样品中多酚物质进行定性分析；根据得到的外混合多酚标准品溶液的指纹图谱的峰面积计算得到不同多酚含量标准曲线方程，将待测样品中多酚的HPLC指纹图谱的峰面积代入其中来对待测样品中多酚物质进行定量分析。该方法操作简单、准确，灵敏度高，分析时间短。

主权项

一种葡萄酒中多酚物质的高效液相色谱分析方法，其特征在于：（1）、精确吸取20‑30mL的待测葡萄酒经过有机相针式过滤器过滤，然后采用固相萃取柱对过滤后的待测葡萄酒进行前处理，得到待测葡萄酒样品；其中，固相萃取柱对过滤后的待测葡萄酒进行前处理的步骤如下：过滤后的待测葡萄酒经5‑8min通过固相萃取小柱，待过滤后的待测葡萄酒全部吸附，分别以8ml二次去离子水，5mL的体积百分比浓度为2‑4%的乙腈水溶液冲洗固相萃取小柱后，连续抽真空3‑5min，用3‑5mL纯乙腈洗脱，洗脱流速为1.8‑2.0mL/min，所得的洗脱液在氮吹仪上于55℃下蒸发至近干后，用纯乙腈溶剂准确定容到1.0‑2.0mL，即得待测葡萄酒样品；（2）、利用安捷伦1260 Infinity高效液相色谱仪，首先将高效液相色谱仪器调整至工作状态，然后用按体积百分比计算，即乙腈：二次去离子水为5‑20%：80‑95%的比例组成的流动相反复冲洗色谱柱直至其基线稳定；然后，对步骤（1）所得的待测葡萄酒样品进行梯度洗脱分析，即得到待测葡萄酒样品中多酚物质的高效液相色谱指纹图谱的保留时间和峰面积；所述的高效液相色谱仪的色谱条件设定如下：流动相为纯乙腈溶剂和体积百分比浓度为0.1%‑0.3%的磷酸水溶液；洗脱时间为0‑8min，体积百分比浓度从9%‑12%变化至19%‑21%的乙腈流动相；洗脱时间为8‑10min，体积百分比浓度从19%‑21%变化至94%‑96%的乙腈流动相；洗脱时间为10‑13min，体积百分比浓度从94%‑96%变化至 89%‑91%的乙腈流动相；流速为1.4‑1.6mL/min；色谱柱的温度为28‑32℃；进样量为5‑15μL；（3）、配制多酚物质的单一标准品溶液，分别经过有机相针式过滤器过滤，而后用高效液相色谱仪按与步骤（2）中的色谱条件相同的条件下进行分析，分别得到多酚物质的单一标准品的高效液相色谱指纹图谱中的保留时间；所述的多酚物质的单一标准品溶液，分别为没食子酸的乙腈溶液、香豆酸的乙腈溶液、绿原酸的乙腈溶液、咖啡酸的乙腈溶液、阿魏酸的乙腈溶液和槲皮素的乙腈溶液；与步骤（2）得到的待测葡萄酒中多酚物质高效液相色谱指纹图谱中的保留时间进行对照，从而对待测葡萄酒中的多酚物质进行定性分析；或配制一系列浓度梯度的外混合多酚标准品溶液经过有机相针式过滤器过滤，而后用高效液相色谱仪按步骤（2）中的色谱条件相同的条件下进行分析，得到一系列浓度梯度的外混合标准溶液的高效液相色谱指纹图谱中的峰面积，以峰面积为横坐标，多酚物质的浓度为纵坐标，得到不同的标准多酚物质的浓度与峰面积的关系图，然后通过线性回归得到不同的标准多酚物质的浓度与峰面积的标准曲线方程；所述的一系列浓度梯度的外混合多酚标准品溶液，为没食子酸、香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和槲皮素的混合物的乙腈溶液；将步骤（2）中所得的待测葡萄酒样品的高效液相色谱指纹图谱中的不同峰面积分别代入到上述的对应的不同的标准多酚物质的浓度与峰面积的标准曲线方程中，求出待测葡萄酒样品中的不同的多酚物质的含量，从而实现对葡萄酒中的不同的多酚物质进行定量分析。