一种蒙药香青兰组织培养再生体系建立的方法

摘要

本发明涉及一种蒙药香青兰无菌苗子叶愈伤组织的诱导及再生体系建立的方法，属于生物技术领域植物组织培养范畴。包括以下几个步骤：(1)香青兰无菌苗的获取；(2)子叶愈伤组织的诱导与继代培养；(3)不定芽的诱导分化培养；(4)再生植株的生根诱导培养；(5)香青兰再生植株的驯化与移栽。本方法选用香青兰无菌苗的子叶为外植体，通过调整添加特定激素的种类与浓度，对MS培养基进行不同方法的改良，最终通过诱导得到蒙药香青兰的愈伤组织进而建立了再生体系，获得外植体容易，操作方法相对简单，培养周期短，繁殖系数高，为进一步扩大栽培香青兰提供良好的种苗或可作为优秀的科研材料进行该物种的遗传转化等研究。

主权项

一种蒙药香青兰组织培养再生体系建立的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）种子表面消毒及无菌苗培养挑选籽粒饱满的香青兰种子，经流水冲洗4‑7min去除表面尘土杂物，无菌水冲洗4‑7次后置于超净工作台上，用体积浓度为70%乙醇浸泡30‑40s，无菌水冲洗2‑4次；再用体积浓度0.1% HgCl₂消毒4‑6 min，无菌水震荡冲洗4‑6次，接种在含有100 mL的MS₀固体培养基三角瓶中，将三角瓶瓶身用牛皮纸包裹，28±2 ℃条件下培养，待种子萌发后去除牛皮纸光照培养，光照12‑14 h/d，光照强度1800‑2200 1ux；2）愈伤组织的诱导：取生长健壮的香青兰无菌苗，切取幼嫩子叶接种于诱导培养基MS₁上，每瓶接种3‑4块，无光照下培养9‑12 d后转入正常光照下培养，13‑16d后观察并统计愈伤组织诱导率，诱导光照培养条件为：光照12‑14 h/d，光照强度1800‑2200 1ux，温度28士2 ℃；3）愈伤组织的继代培养：将诱导得到的黄绿色愈伤组织接种在继代培养基MS₂中进行继代培养；继代培养条件为：光照12‑14 h/d，光照强度1800‑2200 1ux，温度28士2 ℃；4）不定芽的诱导分化：将经过连续继代培养3‑4次后得到的黄绿色愈伤组织转到不定芽分化培养基MS₃中进行诱导，培养条件为：光照12‑14 h/d，光照强度1800‑22001ux，温度28士2 ℃；5）所述诱导生根：经过不定芽诱导得到再生芽2‑3片左右时转入诱导生根培养基MS₄进行生根诱导，培养条件为：光照12‑14 h/d，光照强度1800‑2200 1ux，温度28士2 ℃；6）再生植株移栽：再生植株长出4‑6条根后，将三角瓶瓶口打开，置于阴凉、空气流通处炼苗，7‑8天后将再生苗取出，经流水冲洗掉根基部的培养基残留物，再用蒸馏水冲洗几次，用体积浓度为0.08‑0.13%多菌灵浸泡6‑8 min，转至移栽基质中，基质为松树皮、泥炭土、活苔藓与陶粒，按质量比1：1：1：1混合，外扣遮光塑料，每天浇透水1‑3次，培育温度28士2 ℃，最低温度不低于20 ℃，待幼苗长出3‑4片新叶，苗高8‑12cm左右移栽到正常土壤下在自然环境中继续培育。