用于前列腺细胞培养的前列腺细胞外基质凝胶

摘要

本发明涉及一种用于前列腺细胞培养的前列腺细胞外基质凝胶。该前列腺细胞外基质凝胶呈白色半透明状，具有良好的生物相容性；利用该前列腺细胞外基质凝胶培养人体前列腺上皮细胞，细胞呈簇状三维立体空间生长模式，这与哺乳动物机体内细胞生长生理状态相一致，能够更好地模拟细胞在哺乳动物机体内的自然生长环境；且增殖期较长(11天)，比利用现有技术所培养的细胞增殖期延长了6天。

主权项

一种用于前列腺细胞培养的前列腺细胞外基质凝胶，其特征在于，所述前列腺细胞外基质凝胶的制备方法包括以下步骤：A.前列腺细胞外基质的制备：无菌条件下取雄性成年哺乳动物膀胱组织切片，切片的规格为1cm×1cm×0.5cm；取切片10片，加入5‑15mL浓度为9‑11kIU/mL的抑肽酶溶液，于4℃条件下搅拌45‑55h；接着在5‑10mL质量分数为0.85‑1.2％的聚乙二醇辛基苯基醚溶液中于4℃条件下搅拌20‑30h；然后在5‑10mL质量分数为0.75‑1.5％的十二烷基硫酸钠溶液中于4℃条件下搅拌20‑30h；再在5‑15mL DNA水解酶的浓度为45‑55U/mL、RNA酶A的浓度为0.5‑1.5U/mL的溶液中在4℃条件下搅拌20‑28h；用1×PBS缓冲液清洗三次，每次5min，冷藏、在真空条件下冷冻干燥通过10‑15kGy Co⁶⁰辐照杀菌，并置于‑20℃条件下存放；B.前列腺细胞外基质凝胶的制备：将步骤A所得样品于‑80℃冷冻，然后用冷冻研磨机研磨45‑60h成为粉末，取1g研磨后粉末和100mg胃蛋白酶混合在100mL的0.01mol/L盐酸溶液中，室温搅拌40‑55h，将混合物在4℃条件下移至离心管中，在转速3000r/min条件下离心15min；收集上清液，过滤，取过滤后溶液置于‑80℃条件下储存直至进一步使用；再在4℃条件下加入15mL10×PBS缓冲液，用0.01nmol/L NaOH溶液将过滤后溶液的pH值调至7.4，置于37℃条件下孵育30min得到前列腺细胞外基质凝胶。