一种内生竹黄真菌发酵制备苝醌类化合物的方法

摘要

一种内生竹黄真菌发酵制备苝醌类化合物的方法，本发明涉及利用竹黄菌株Shiraia sp.slf-14，保藏号为CCTCC NO：M 209294，已在ZL200910186852.3公开，通过液体发酵制备获得竹红菌甲素(Hypocrellins A)、竹红菌乙素(Hypocrellins B)、痂囊腔菌素B(Elsinochromes B)及痂囊腔菌素C (Elsinochromes C)四种苝醌类化合物。本发明为这4种苝醌类化合物的生产制备提供了一种新的资源和方法。

主权项

一种内生竹黄真菌发酵制备苝醌类化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：a）制备内生竹黄菌株Shiraia sp. slf‑14的发酵培养物，将内生真菌Shiraia sp. Slf14发酵菌体进行干燥、碾碎，用质量分数60%的乙醇浸提3次，每次24h，合并提取液后减压浓缩，用等体积的石油醚、乙酸乙酯进行梯度萃取，石油醚相减压浓缩后得到浸膏A；乙酸乙酯相减压浓缩后得到浸膏B；所述的步骤a）内生竹黄菌株Shiraia sp. slf‑14发酵是由液体发酵培养获得，培养基组成为：碳源0‑50g/L，氮源0‑50g/L，马铃薯汁200 g/L，KH₂PO₄ 0‑5g/L，NaCl 0‑5g/L，用自来水配制；液体发酵条件：将斜面保藏的菌株Slf14转接至马铃薯‑琼脂（PDA）平板上进行活化，28℃培养7d后接种至装有150mL马铃薯液体（PDB）培养基的500mL摇瓶中，发酵温度为20‑32℃发酵周期为8‑14d；b) 将浸膏A经硅胶柱层析，用石油醚/ 乙酸乙酯作为洗脱剂，从体积比100∶0 ～0∶100进行梯度洗脱，收集石油醚/ 乙酸乙酯体积比20∶80梯度洗脱下来的馏分A1；馏分A1经硅胶柱层析，以氯仿‑甲醇体积比从100∶0 ～0∶100梯度洗脱，收集氯仿/甲醇以20：1的馏分，重结晶分离到化合物Ⅰ和Ⅱ，分别为竹红菌甲素和竹红菌乙素；c) 将浸膏B经硅胶柱层析，用氯仿/甲醇作为洗脱剂，从体积比100：0～0:100进行梯度洗脱，获得馏分B1，B2及B3，其中馏分B1分别经正相硅胶柱色谱反复洗脱、重结晶分离到化合物Ⅰ和Ⅱ，分别为竹红菌甲素和竹红菌乙素；而馏分B2和B3分别经正相硅胶柱色谱反复洗脱、重结晶分离到化合物Ⅲ和Ⅳ，即为痂囊腔菌素B和痂囊腔菌素C。