一种高效分离纯化乳腺上皮细胞的方法

摘要

本发明公开了一种高效分离纯化乳腺上皮细胞的方法，适用于多种哺乳动物。本方法通过无菌手术采集妊娠中后期或泌乳期成年哺乳动物的乳腺组织，使用发明的方法，一步操作即可达到分离纯化目的，整个实验简单高效，省去了传统方法中反复差速消化和差速贴壁的纯化过程，通过本方法获得的乳腺上皮细胞纯度达到98%以上，并可在体外连续培养传代40代以上，不影响乳腺上皮细胞的泌乳功能。本发明的细胞可用于乳腺生长发育、泌乳机制、乳腺生物反应器、转基因动物、乳腺疾病等机理的研究。

主权项

一种高效分离纯化乳腺上皮细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）无菌手术采集动物乳腺实质组织，用含有青霉素、链霉素的Hank’s清洗液清洗，剪碎成1mm³以下的组织小块，置于上述清洗液中室温下震荡，如此反复直至溶液清亮，收集组织小块备用；2）将步骤1）所得组织块放入胶原酶‑透明质酸酶消化液中37℃ 震荡消化，200目细胞筛过滤，收集滤取组织小块，接着用步骤1）中清洗液清洗组织小块3‑5次，将清洗后的组织小块置于细胞培养液中，接种到细胞瓶中培养，当瓶底细胞生长70%以上时，用0.25%胰酶‑0.02%EDTA消化收集细胞，进行传代培养。