一种静注人免疫球蛋白（PH4）的制备方法

摘要

本发明公开了一种静注人免疫球蛋白（PH4）的制备方法，包括如下步骤：（1）组分II+III沉淀的悬浮；（2）低温抽提；（3）压滤；（4）超滤透析脱醇；（5）阴离子交换柱层析；（6）超滤浓缩及调节；（7）低PH孵化；（8）纳米膜除病毒过滤；（9）除菌过滤并分装。本发明采用含乙醇的抽提液，使IgG在低温下选择性溶出，再经一步阴离子交换柱层析完成对IgG的纯化；制备过程中无添加高浓度乙醇的操作，减少了乙醇对蛋白的变性损伤作用；超滤过程中，采取了蛋白保护措施减少了蛋白的剪切损伤；本发明工艺流程简洁，工序少，大大缩短了生产周期；制品的多聚体、IgA、PKA及ACA含量均比传统工艺大幅下降，得率超过2000瓶/吨血浆，远高于传统工艺。

主权项

一种静注人免疫球蛋白（PH4）的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）组分II+III沉淀的悬浮按一定的稀释比，将组分II+III沉淀投入到预先配制的溶解缓冲液中均匀搅拌1‑3小时，使沉淀充分悬浮分散；（2）低温抽提将步骤（1）得到的悬浮液与预先配制的含乙醇的低温抽提液混合，搅拌3‑5小时，使目标蛋白充分抽提，得到均匀的悬浮液；（3）压滤将步骤（2）得到的悬浮液在‑2~0℃下压滤，收集滤液,及时在滤液中加入山梨醇3‑5%（w/w），充分搅拌使其溶解；（4）超滤透析脱醇用截留分子量10K‑30K的超滤膜浓缩步骤（3）得到的滤液，然后用4‑6倍体积的透析液1恒体积透析脱去乙醇，得到粗纯的IgG溶液；（5）阴离子交换柱层析步骤（4）得到的IgG溶液上阴离子交换柱，控制上样液的线流速不高于100cm/h，柱子预先用平衡缓冲液平衡；上柱过程中，收集流穿液，上柱结束后，用平衡缓冲液冲洗柱子，冲洗液并入流穿液中；（6）超滤浓缩及调节用截留分子量10K‑30K的超滤膜浓缩步骤（5）得到的流穿液，然后用透析液2恒体积透析4‑6倍，然后浓缩至蛋白浓度6‑7%(w/v)左右，转移出超滤膜包并用透析液2后洗膜包，再用透析液2调蛋白浓度至5.30‑5.50%(w/v)，用0.5M盐酸溶液调蛋白溶液PH至3.95‑4.15；（7）低PH孵化用0.22微米的除菌滤芯过滤后置于室温孵化21天；（8）纳米膜除病毒过滤用20纳米的滤芯过滤步骤（7）孵化结束的蛋白溶液以去除病毒；（9）除菌过滤并分装。