一种改良简化的植物染色体荧光原位杂交方法

摘要

本发明提供了一种改良简化的植物染色体荧光原位杂交方法。由于该方法不包括杂交前对标本玻片的长时间脱水过程和杂交后对标本制片的多次漂洗流程，因此是一种对生物细胞样品中的核内染色体进行快速原位杂交的技术。所述方法主要涉及：1）通过变温催芽、8-羟基喹啉预处理和卡诺固定液固定植物根尖分生区细胞分裂旺盛的组织，获得图像清晰、染色体分散良好的中期分裂相标本；2)不同标记荧光探针混合后，一次变性完并低温保存，可实现长期多次使用；3)标本制片采用NaOH醇溶液变性；4）杂交反应过程中，通过简化多步脱水、漂洗等操作步骤，从而极大地精简了整个繁琐的杂交流程。尤其是，所述方法特别适用于快速大规模检测和分析植物远缘及近缘杂交种中的外源染色体和染色体片段，同时很好地保持了标本染色体形态和结构的真实性。

主权项

一种改良简化的植物染色体荧光原位杂交方法，其特征在于：在标本制片过程中，（1）根尖的培养：种子采用23℃先催芽，待露白转至4℃放置1‑3天，后又放回23℃继续发芽至根系长约2‑3cm；（2）根尖预处理：将适宜长度的根尖收集于1×10^‑6 M 8‑羟基喹啉中，于0℃冰水混合物下处理14‑20h；（3）固定：用卡诺固定液（V_冰醋酸 : V_无水乙醇=1 : 3）于30℃下固定2～3天（或室温下固定3‑5天）；（4）染色并制片：用醋酸洋红染色根尖15‑20分钟后，切下根尖分生组织，滴加45%醋酸后压片并烤片。