一种防黄瓜枯萎病生物制剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种防黄瓜枯萎病生物制剂的制备方法，属于生物制剂领域。本发明先将土豆泥、葡萄糖和琼脂为原料制成活化培养基，再将枯草芽孢杆菌和放线菌分别接种到培养基中进行培养，将活化的菌种转移至液体培养基中进行培养，将培养后的菌丝放入发酵罐加入醋糟等物质一起发酵，发酵后过滤，将过滤液进行离心分离取上清液，将其和蛋黄、蓖麻油制得的粘稠混合液进行混合，进行超声分散，即可得一种防黄瓜枯萎病生物制剂，本发明先培养和筛选出具有较强拮抗作用的枯草芽孢杆菌和放线菌，其相互协同作用可以有效促进土壤微生物菌群结构健康生长，还可提高土壤酶活性，有效降低黄瓜枯萎病的发病率90%以上。

主权项

一种防黄瓜枯萎病生物制剂的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）称取200～300g土豆泥，20～30g葡萄糖和15～18g琼脂放入培养皿中加入800～1000mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀，再用质量浓度为9%的盐酸溶液调节pH至6～7，之后移入灭菌罐，在110～120℃下高温灭菌20～30min，制得活化培养基；（2）将3～5g枯草芽孢杆菌和4～6g放线菌分别接种在两个活化培养基中，之后移入恒温培养箱，在25～35℃下培养5～7天，将活化后的菌种按2～5%的接种量分别转移接种至LB和PDA液体培养基中，于30～38℃下摇床振荡36～48h，之后放入恒温箱，在25～35℃下培养1～2周；（3）用消毒棉签分别刮取3～5g两个培养基中最茂盛的菌丝放入发酵罐，再称取5～10g醋糟、3～5g葡萄糖，配以300～500mL蒸馏水一起倒入发酵罐，搅拌均匀后，用保鲜膜密封罐口，于25～35℃下发酵2～3天；（4）发酵完成后过滤，将发酵液移入卧式高速离心机，设置离心转速为7000～8000r/min进行离心处理10～20min，之后分离得到上清液；（5）取5～10个新鲜鸡蛋，用注射剂吸出蛋清，得到蛋黄放入500mL烧杯中，用磁力搅拌机以300～400r/min的转速搅拌10～20min，之后降低转速至100～200r/min并在搅拌状态下加入50～100mL蓖麻油，继续搅拌10～20min，得粘稠混合液；（6）将上述粘稠混合液和离心得到的菌液按体积比为2:3进行混合，放置在超声振荡仪中超声分散20～30min，使两者混合均匀，超声频率为25～35kHz，超声功率为100～200W，之后装瓶即得一种防黄瓜枯萎病生物制剂。