拉沙热病毒样颗粒、其制备方法与应用

摘要

本发明涉及一种拉沙热病毒样颗粒、其制备方法与应用。本发明将拉沙热病毒Z、N、GPC基因分别与昆虫细胞表达载体连接，利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统来生产拉沙热病毒样颗粒。将所述拉沙热病毒样颗粒与防腐剂和佐剂混合，即制备得到拉沙热疫苗。本发明的拉沙热病毒样颗粒及其疫苗能高效诱导机体产生中和抗体，填补了国内此类疫苗的空白。本发明的制备方法适于工业化生产，具有成本低、安全性高等优点。

主权项

一种拉沙热病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)合成拉沙热病毒Z基因、拉沙热病毒N基因和拉沙热病毒GPC基因；所述拉沙热病毒Z基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；拉沙热病毒N基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；拉沙热病毒GPC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；(2)将步骤(1)制得的拉沙热病毒Z基因、拉沙热病毒N基因和拉沙热病毒GPC基因分别插入到昆虫细胞表达载体中，转化含有重组杆状病毒基因组的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，提取阳性质粒，制得整合了拉沙热病毒Z基因、拉沙热病毒N基因和拉沙热病毒GPC基因的重组杆状病毒Bacmid质粒；(3)将步骤(2)制得的重组杆状病毒Bacmid质粒分别转染昆虫细胞，拯救获得整合了拉沙热病毒Z基因的重组杆状病毒、整合了拉沙热病毒N基因的重组杆状病毒、整合了拉沙热病毒GPC基因的重组杆状病毒；(4)将步骤(3)制得的整合了拉沙热病毒Z基因的重组杆状病毒、整合了拉沙热病毒N基因的重组杆状病毒、整合了拉沙热病毒GPC基因的重组杆状病毒混合后接种昆虫细胞，培养后收获上清，上清经纯化，制得拉沙热病毒样颗粒。