一种pH稳定性提高的谷氨酸脱羧酶突变体及其应用

摘要

本发明公开了一种酸性稳定的谷氨酸脱羧酶(GAD)的pH稳定性向中性范围偏移的突变体，属于生物工程领域。将来源于植物乳杆菌GB01-21谷氨酸脱羧酶的谷氨酸脱羧酶编码基因进行定点突变，主要将第89位的谷氨酸E分别突变为精氨酸R或丙氨酸A。谷氨酸脱羧酶突变体分别在pH6.5时的相对酶活由原来的38％提高至72％或84％，在中性pH范围内的酶活稳定性显著提高。以重组大肠杆菌合成的谷氨酸脱羧酶突变体进行转化时，GABA产量达到260g/L,产率为99.6％；而以重组谷氨酸棒杆菌合成的谷氨酸脱羧酶突变体进行转化时，GABA产量达到116g/L,产率为99.5％。本发明减少了发酵设备在酸性条件下的损耗，为高效合成γ-氨基丁酸奠定了基础。

主权项

一种在中性pH范围内的酶活及pH稳定性提高的谷氨酸脱羧酶突变体，其特征在于，对植物乳杆菌GB01‑21来源的谷氨酸脱羧酶编码基因进行定点突变得到；是将谷氨酸脱羧酶氨基酸序列的第89位的谷氨酸E分别突变为精氨酸R或丙氨酸A。