一种热加工食品中蛋清含量的检测方法

摘要

本发明公开了一种热加工食品中蛋清含量的检测方法。本发明包被的抗原为高纯度的热处理的卵清蛋白，以已知蛋清添加量的鱼糜制品提取物或热处理的高纯度卵清蛋白为标准品，建立抑制性ELISA法；对鱼糜制品和鱼糜制品外的热加工食品中的蛋清含量进行准确检测。本发明的方法灵敏、简单，准确；是有效的检测热加工食品中蛋清含量的方法，具有重要的现实意义。

主权项

一种热加工食品中蛋清含量的检测方法，其特征在于，步骤为，将卵清蛋白抗原于95℃加热15min后配成浓度为200ng/孔，进行96孔板的包被，进行第一次孵育，37℃，2h；TBST洗涤后，再用含5重量%脱脂奶的TBST缓冲液封闭1h，每孔加入200µL封闭液；将稀释后的热加工食品或不同浓度的标准品和等体积的抗卵清蛋白单克隆抗体各50uL分别进行预孵育，37℃，1h，再分别加入上述封闭好的96孔板，100uL/孔，37℃孵育1h，再加入100µL辣根过氧化物酶标记的抗小鼠HRP‑IgG为二抗37℃反应50min后，每孔加入100µL四甲基联苯胺作为显色剂，37℃反应30min，每孔加50µL H₂SO₄终止反应，测定OD₄₅₀；根据公式y=0.25+0.74/(1+x/1.33)^1.55进行计算，其中x为样品吸光值与空白对照吸光值的比值；根据y值判断热加工食品中蛋清的含量；所述稀释后的热加工食品是将热加工食品溶于10倍体积含8 mol/L尿素及0.1 mmol/L DTT的20 mmol/L pH 8.0的Tris‑HCl缓冲液，再分别用20 mmol/L pH 7.4的PBS缓冲液进行稀释，使其测定的OD值位于标准曲线线性区域内。