一种聚丙烯酸树脂固定化酶连续降解木质素的方法

摘要

一种聚丙烯酸树脂固定化酶连续降解木质素的方法，属于木质素酶解技术领域。首先在碱性条件下溶解聚丙烯酸树脂，得到载体溶液，然后加入酶液和交联剂，在酸性条件下使固定化酶析出，离心洗涤后得到固定化酶。最后将固定化酶放入木质素溶液中，在30～50℃、pH3～5下水解12～48h，过滤后检测滤液中木质素的结构变化，然后将滤渣放入新的木质素中，重复水解操作。该方法得到的固定化酶的酶解效率明显提高，经10次重复使用后仍保持有85%以上的活性，而游离酶只能使用1次，并且每次水解后剩余的残渣参与下一次的水解，减少了酶的损失，固定化酶也表现出良好的操作稳定性，有利于工业化生产。

主权项

一种聚丙烯酸树脂固定化酶连续降解木质素的方法，其特征在于该方法具体包括以下步骤：（1）称取聚丙烯酸树脂放入去离子水中，配置成质量浓度为4～8%的溶液，再加入1～3mol/L的氢氧化钠溶液调 pH为10～11，使其溶解，再用1～3mol/L的乙酸调pH到8～9，即得到载体溶液；（2）将浓度为0.25～2mg/mL的酶液加入载体溶液中，再将交联剂按1～3mg/mL的浓度加入载体溶液中，搅拌3～6h，再滴加1～3mol/L乙酸调节pH值到3～4，使固定化酶析出，静置20～40min，然后进行离心处理，离心分离的速度为4000～6000rpm，时间为5～15min，最后将沉淀物用含0.5～2mol/L的氯化钠和0.5～2mol/L氯化钙的0.01～0.03mol/L乙酸溶液洗涤3～5次，即得到固定化酶；（3）用10～100mmol/L醋酸‑醋酸钠缓冲液配制浓度为10～100mg/mL的木质素溶液中，将固定化酶放入木质素溶液中，使固定化酶浓度达到10～100IU/mL，然后在30～50℃、pH3～5下水解12～48h，过滤后检测滤液中木质素的结构变化，然后将滤渣放入新的木质素中，重复水解8～15次。