基于组合合成技术合成可控的人源化抗体库的方法与应用

摘要

本发明涉及合成氨基酸变化可控的人源化抗体库的方法，包括：按照DNA固相亚磷酰胺三酯法，合成3′端的一段序列，直至产生氨基酸变化位点；将中间产物全部收集起来；根据设计的序列要求混合，按比例分组，达到变化数量的可控性；再继续合成相应的密码子碱基序列直至下一个氨基酸变化位点；收集中间产物，重新混合均匀，直至产生氨基酸变化位点；根据设计的序列要求，按照上述步骤完成待合成DNA序列和5′端全长序列的合成；重复1-3的步骤产生氨基酸任意位点的任意变化和任意变化的数量的可能性。本发明的方法可控性更强，灵活性高，无突变，合成的人源化抗体库的库容量大。

主权项

一种基于组合合成技术合成可控的人源化抗体库的方法，其包括以下步骤：第一步：设计人源化抗体库：在预构建的人源化抗体库中的合成序列中，在任意位置或者任意比例引入氨基酸；第二步：组合合成随机引物库:在氨基酸变化区域，根据反向中心法则和DNA编码规则，设计对应的DNA序列，通过DNA固相亚磷酰胺三酯法合成随机的引物库；第三步：构建人源化重组抗体库：在扩增体系中加入第二步中获得的引物库中的引物，进行扩增，扩增产物进行酶切后连入载体，获得人源化重组抗体库；其特征在于，第二步中所述的组合合成随机引物库，包括以下几步：(1)按照DNA固相亚磷酰胺三酯法，合成3′端的一段序列，直至产生氨基酸变化位点；(2)将(1)中合成的中间产物全部收集起来；(3)根据设计的序列要求混合，按比例分组，从而达到变化数量的可控性；(4)再继续合成相应的密码子碱基序列直至下一个氨基酸变化位点；(5)根据氨基酸变化位点按照(2)‑(4)中的收集、混合分组、合成方法完成所有氨基酸变化位点；(6)收集(5)中合成的中间产物后无需分组，直接合成5’端一段非氨基酸序列；根据设计的序列要求，按照所述(1)‑(6)的方法完成待合成DNA序列和5′端全长序列的合成。