发明名称 |
复制型重组人55型腺病毒载体及其制备方法和应用 |
摘要 |
本发明公开了一种复制型重组人55型腺病毒载体及其制备方法和应用。所述复制型重组人55型腺病毒载体是以同源重组技术将人55型腺病毒基因组环化,以同源重组及双抗性筛选技术敲除Ad55的E3基因,且可以整合入外源基因表达框,将E3基因缺失的Ad55载体质粒线性化后,转染哺乳动物细胞可成功拯救并大量生产,进一步经密度梯度离心得到纯化的重组Ad55载体,以该载体携带外源基因可在靶细胞内实现高效表达,且外源报告基因的活性可反映病毒的生长特性。本发明基于人Ad55的复制型载体可潜在地应用于:抗人55型腺病毒疫苗研发;抗人55型腺病毒药物及中和抗体筛选;抗其他病原体疫苗的研发;生物学研究的报告示踪系统等。 |
申请公布号 |
CN105274142A |
申请公布日期 |
2016.01.27 |
申请号 |
CN201410293359.2 |
申请日期 |
2014.06.25 |
申请人 |
中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
发明人 |
陈凌;冯立强;孙彩军;秦成峰 |
分类号 |
C12N15/861(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61K39/235(2006.01)I;A61P31/20(2006.01)I;C07K16/08(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/861(2006.01)I |
代理机构 |
广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 |
代理人 |
万志香 |
主权项 |
一种复制型重组人55型腺病毒载体的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)以Ad55基因组为模板,分别扩增基因组两端反向重复序列作为同源重组臂L和R,并连接至氨苄抗性载体,线性化后与人55型腺病毒基因组在大肠杆菌中同源重组,得到环化的基因组质粒A;(2)以Ad55基因组为模板,扩增E3基因两端序列并反向连接至卡那抗性载体,线性化后与线性化的步骤(1)所述基因组质粒A重组,再经氨苄/卡那双抗筛选,得到去除E3基因的基因组质粒B;(3)构建敲除Kana基因的穿梭质粒,与线性化的步骤(2)所述基因组质粒B同源重组,得到去除Kana基因的pAd55ΔE3质粒,并整合入唯一酶切位点,线性化后转染哺乳动物细胞,密度梯度离心得到纯化的复制型重组人55型腺病毒载体。 |
地址 |
510663 广东省广州市广州科学城开源大道190号 |