一种表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒传染性克隆的构建方法

摘要

本发明涉及一种表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒传染性克隆的构建方法，是将特定PCR引物扩增出的绿色荧光EGFP基因片段，插入到线性化的REV病毒基因组Env基因的N端，利用商品化的重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆，随后转化到大肠杆菌进行质粒扩增与鉴定；并将阳性克隆转染DF1细胞，拯救获得表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒。

主权项

一种表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒传染性克隆的构建方法，其特征在于包括以下步骤：1)利用下述引物，以REV传染性克隆质粒SNV质粒为模板，PCR扩增出SNV线性化载体；上游引物：5′CTAATTCTCCTTGTGGCTTGGTGGGGGTTT3′；下游引物：5′GATTTTGCTCGCCTGGTCAACTTTACCCTC3′。2)利用下述引物，以pcDNA3.1‑EGFP质粒为模板，PCR扩增出绿色荧光蛋白基因EGFP；上游引物：5′CAGGCGAGCAAAATCATGGTGAGCAAGGGCGAG3′；下游引物：5′CACAAGGAGAATTAGCTTGTACAGCTCGTCCAT3′。3)利用重组酶ExnaseTM II对步骤1)和2)得到的PCR产物进行快速重组克隆；阳性克隆转染DF1细胞拯救出表达绿色荧光囊膜融合蛋白的REV病毒。