半固体筛选培养基以及杂交瘤细胞的筛选方法

摘要

本发明公开了一种半固体筛选培养基，每40mL半固体筛选培养基由如下成分组成：0.8mL的50×HAT贮存液、10mL的胎牛血清、0.4mL的100×青霉素和链霉素的双抗溶液、0.16mL的1mol/L的L-谷氨酰胺溶液、0.5mL的1mmol/L的β-巯基乙醇溶液、0.4mL的100×异硫氰酸素标记的兔抗鼠二抗溶液以及余量的甲基纤维素半固体培养基。本发明还公开了一种采用上述半固体筛选培养基的杂交瘤细胞的筛选方法，融合细胞在半固体培养基上呈集落生长，彼此分离，每个克隆由单个细胞形成，避免了不分泌抗体的杂交瘤生长很快而影响分泌抗体的杂交瘤细胞的生长，与传统的有限稀释法相比，筛选效率较高。

主权项

一种半固体筛选培养基，其特征在于，每40mL所述半固体筛选培养基由如下成分组成：0.8mL的50×HAT贮存液、10mL的胎牛血清、0.4mL的100×青霉素和链霉素的双抗溶液、0.16mL的1mol/L的L‑谷氨酰胺溶液、0.5mL的1mmol/L的β‑巯基乙醇溶液、0.4mL的100×异硫氰酸素标记的兔抗鼠二抗溶液以及余量的甲基纤维素半固体培养基；所述甲基纤维素半固体培养基由按照体积比为1：1的2×1640培养基和4％的甲基纤维溶液充分混匀得到；所述2×1640培养基通过如下操作制备：将10.4g的1640培养基干粉、1gNaHCO₃、0.055g丙酮酸钠加入500mL的超纯水充分搅拌溶解，接着调节pH值为7.0～7.4，最后通过0.22μm滤膜过滤除菌，得到所述2×1640培养基。