基于磁性分离和量子点标记的人副流感病毒快速检测方法和试剂盒

摘要

本发明公开了一种基于磁性分离和量子点标记的检测人副流感病毒抗原的快速检测方法及检测试剂盒，其中，该试剂盒由具有富集I、II、III型人副流感病毒功能的抗人副流感病毒免疫纳米磁珠、量子点标记的抗人副流感病毒纳米探针、质控品以及PBST缓冲液所组成；质控品包括阳性质控品以及阴性质控品；阳性质控品由灭活的人副流感病毒干燥结合到拭子上而成；阴性质控品是经临床确定为人副流感病毒阴性的人群的咽拭子。本发明提供了一种基于磁性分离和量子点标记的简便、快速、高灵敏度的检测人副流感病毒抗原的检测方法和试剂盒，以及该试剂盒的制备及使用方法。

主权项

一种基于磁性分离和量子点标记的检测人副流感病毒抗原的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1)兔抗I、II及III型人副流感病毒HN蛋白多克隆抗体的制备；2)鼠抗I、II及III型人副流感病毒HN蛋白多克隆抗体的制备；3)将步骤1)制备的兔抗I、II及III型人副流感病毒HN蛋白多克隆抗体分别与纳米磁珠通过共价偶联，分别制备抗I、II及III型人副流感病毒免疫纳米磁珠，将上述三种免疫纳米磁珠等量混合即制得抗人副流感病毒免疫纳米磁珠；4)将步骤2)制备的鼠抗I、II及III型人副流感病毒HN蛋白多克隆抗体分别与纳米量子点通过共价偶联，分别制备量子点标记的抗I、II及III型人副流感病毒纳米探针，将上述三种纳米探针等量混合即制得量子点标记的抗人副流感病毒纳米探针；5)取人呼吸道分泌物样本，用PBST缓冲液溶解后，加入步骤3)制备得到的抗人副流感病毒免疫纳米磁珠，充分混合，反应15‑45min后进行磁分离，以PBST缓冲液洗涤2遍后，向磁分离得到的沉淀物中加入步骤4)制备得到的量子点标记的抗人副流感病毒纳米探针，反应25‑45min后进行磁分离，以PBST缓冲液洗涤2遍后，使用荧光酶标仪读取荧光值；所述PBST缓冲液中各组分含量分别为8g/LNaCL，0.2g/LKCl，0.24g/LKH₂PO₄，1.44g/L Na₂HPO₄，0.5ml/L Tween‑20，所述PBST缓冲液的pH＝7.4；6)根据步骤1)‑步骤5)的方法分别检测四份经临床确定为人副流感病毒阴性的人群的呼吸道分泌物样品，读取荧光值；所述人副流感病毒阴性的人群的呼吸道分泌物样品简称人副流感病毒阴性对照样品；所述四份人副流感病毒阴性对照样品的荧光值的平均值与3倍标准差之和即为CUT‑OFF值；若步骤5)中人呼吸道分泌物样本的检测荧光值大于CUT‑OFF值，则判断为人呼吸道分泌物样本中人副流感病毒抗原为阳性；若步骤5)中人呼吸道分泌物样本的检测荧光值小于CUT‑OFF值，则判断为人呼吸道分泌物样本中人副流感病毒抗原为阴性。