一种利用霉菌代谢产物建立指纹图谱以及利用指纹图谱鉴定霉菌菌种的方法

摘要

本发明公开了一种利用霉菌代谢产物建立指纹图谱的方法，将已知霉菌经PDA固体培养基培养后获得霉菌代谢产物，提取纯化后经高分辨质谱检测和Metabolomics XCMS分析，得到霉菌标志性代谢产物和其指纹图谱，将待鉴定霉菌采用同样方法获得指纹图谱；然后与建立的菌种代谢物数据库中已知霉菌标志性代谢产物进行匹配，当两者标志性代谢产物的精确质量数以及精确质量数的出峰时间误差不超过1%时，从而初步鉴定其为同一株菌株，通过筛选产毒真菌的培养条件，有机溶剂提取净化，高效液相色谱高分辨质谱检测，以非靶向代谢检测技术为手段，以靶向代谢检测为基础，具有检测成本低、分析毒素速度快、建立的指纹图谱可以简捷辨别该类产毒真菌，重现性好的优点。

主权项

一种利用霉菌代谢产物建立指纹图谱的方法以及利用该指纹图谱鉴定曲霉菌菌种的方法，其特征在于：所述方法为将已知曲霉菌经PDA固体培养基培养后获得曲霉菌代谢产物，提取纯化后经高分辨质谱检测和Metabolomics XCMS分析，得到曲霉菌标志性代谢产物和其指纹图谱并建立起一套完整的菌种代谢物数据库；利用所述指纹图谱鉴定曲霉菌菌种的方法，将待鉴定曲霉菌经PDA固体培养基培养后获得曲霉菌代谢产物，提取纯化后经高分辨质谱检测和Metabolomics XCMS分析，得到待鉴定曲霉菌标志性代谢产物和标志性代谢产物的指纹图谱；然后与建立的菌种代谢物数据库中已知曲霉菌标志性代谢产物进行匹配，将两者标志性代谢产物的精确质量数以及精确质量数的出峰时间进行比较，来判断是否为同一株菌株；PDA固体培养基内含有山梨酸；所述高分辨质谱检测包括以下步骤：培养至15天、20天、30天时，分别按照以下步骤操作：（1）取带有曲霉菌菌丝的样品，提取后超声再离心，取离心上清液后氮气吹干溶剂，定容，经滤膜过滤，得到样品c；取装有PDA固体培养基的无菌平板，重复以上步骤得对照样品，以kb表示；（2）将样品c和kb在HPLC/TOF‑MS上检测，高能量下做正离子全扫描，分别扫描3次，得到样品c和kb的三个全扫描数据；所述Metabolomics XCMS分析包括以下步骤：将九个样品扫描数据做为实验组，九个对照样品扫描数据做为对照组，使用Metabolomics XCMS软件处理，以离子扫描出峰时间和精确分子量与对照组进行差异性数据分析，得到曲霉菌的详细代谢物信息。