一种提高栖热菌海藻糖合成酶含量的方法

摘要

本发明涉及一种提高栖热菌海藻糖合成酶含量的方法，步骤如下：（1）将栖热菌菌株的液体种子接种到液体培养基中，培养，制得菌株细胞培养液；（2）将菌株细胞培养液置于压力反应器内，在压力下发酵，制得发酵液；（3）将发酵液离心，收集菌体细胞，破碎细胞，制得细胞破碎液，将细胞破碎液采用双水相萃取体系制备海藻糖合成酶。本发明的方法可以提高栖热菌细胞内的海藻糖合成酶含量，降低酶的生产成本；本发明的方法可以实现海藻糖合成酶生产的连续化、规模化，并且酶的生产工艺简便。

主权项

一种提高栖热菌海藻糖合成酶含量的方法，其特征是，步骤如下：(1)从试管斜面上挑取1—2环栖热菌菌株接种到液体种子培养基中，在65～70℃、100～150r/min下培养12～16h，制得活化后的液体种子，然后将液体种子按体积比3％～5％的接种量接种到液体培养基中，在60～70℃、150～200r/min下培养20～24h，制得菌株细胞培养液；(2)将菌株细胞培养液置于压力反应器内，在0.5～2.0MPa压力下发酵1～6h，发酵条件为60～70℃、150～200r/min，制得发酵液；(3)将发酵液离心，收集菌体细胞，破碎细胞，制得细胞破碎液，然后将细胞破碎液采用双水相萃取体系制备海藻糖合成酶；所述的采用双水相萃取体系制备海藻糖合成酶的步骤如下：向细胞破碎液中加入硫酸铵和分子量为2000的聚乙二醇，在总体系中使硫酸铵的质量百分比浓度为8wt％～10wt％、聚乙二醇的质量百分比浓度为10wt％～12wt％，混合均匀，静置分相，制得硫酸铵下相溶液和含有海藻糖合成酶的聚乙二醇上相溶液；向聚乙二醇上相溶液中加入硫酸铵，使硫酸铵在总体系中的质量百分比浓度为5wt％～6wt％，调节溶液的pH值为7.0～8.0，混合均匀，静置分相，制得含有海藻糖合成酶的硫酸铵下相溶液和聚乙二醇上相溶液；将制得的硫酸铵下相溶液，采用超滤膜过滤浓缩，收集截留液，冷冻干燥，制得海藻糖合成酶。