III型火鸡疱疹病毒冻干疫苗

摘要

本发明属于生物制药技术领域，公开了一种利用细胞工厂制备鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒Fc126株活疫苗的方法及其利用这种方法制备的火鸡疱疹病毒疫苗(Fc126株)。本发明通过细胞工厂生产的火鸡疱疹病毒活疫苗(Fc126株)质量优良，免疫效力高，免疫效果稳定；除此之外，其还有代次低、PFU含量高、成本低、操作工艺简单易控制等优点。

主权项

一种制备III型火鸡疱疹病毒疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制备鸡胚成纤维细胞悬液：选择鸡胚，采用连续消化法制备鸡胚成纤维细胞悬液，制成80～120万/ml的细胞密度，混匀后置于细胞工厂，置37℃培养箱静置培养24～36h，获得的鸡胚成纤维细胞单层；2)接种工作毒种并培养病毒：将获得的鸡胚成纤维细胞单层，弃去培养液，以每平方厘米接种2000PFU含量的火鸡疱疹病毒HVT Fc126株的工作毒种，接种至鸡胚成纤维细胞单层中，置37℃培养箱吸附1h后，补加2％w/v血清浓度的M199维持液至每层200ml，37℃继续培养；3)收获：培养至CPE达到70％以上时收获，弃去维持液，加入EDTA‑胰酶混合消化液100～120ml/层，使消化液与细胞充分接触后，弃去胰酶液，加入2％w/v血清浓度的M199维持液150～250ml/层，停止消化；收集消化的细胞分装至离心瓶中，于1500r/min离心10～20分钟，弃上清，收集沉淀细胞；4)裂解：收集沉淀细胞，加入稳定剂SPGA摇匀，取样做收获前无菌检验，进行病毒计数后补加适量的SPGA，使所含的病毒蚀斑数不低于6×10⁶PFU/ml，无菌进行超声波裂解，裂解时间为1min；5)分装：取裂解完后过滤，分装小瓶每支1ml，即得III型火鸡疱疹病毒疫苗成品。