一种来源于放线菌的腈水合酶基因在大肠杆菌中高效表达的方法

摘要

本发明公开了一种来源于放线菌的基因在大肠杆菌中高效表达的方法，属于微生物基因工程技术领域。该方法高效安全，能够在较短的表达周期里获得大量的可溶性腈水合酶，有利于后期大规模生产腈水合酶的提取纯化，以及进一步对其进行腈水合酶进行理论研究。

主权项

一种来源于放线菌的腈水合酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的方法，是采用在腈水合酶B基因序列、A基因序列、以及调控蛋白E基因序列上游替换成大肠杆菌的SD序列和间隔序列，构建带有大肠杆菌的SD序列和间隔序列的pET24a(+)‑(rbs)B(rbs)A(rbs)E，转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达；所述SD序列是SEQ ID NO.6所示的序列，所述间隔序列是SEQ ID NO.7所示的序列；所述腈水合酶基因的核苷酸序列是SEQ ID NO.1所示的序列；所述SD序列和间隔序列是以“SD序列‑间隔序列”的方式将B基因序列、A基因序列、以及调控蛋白E基因序列的上游分别替换成aaggagatatagat。