一种基孔肯雅热病毒的恒温扩增检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种基孔肯雅热病毒的恒温扩增检测试剂盒及检测方法，该试剂盒包含RNA提取试剂、恒温PCR扩增反应液、阳性对照和阴性对照；本发明的检测试剂盒特异性好、灵敏度高；从病毒RNA逆转录到链置换扩增全部恒定同一温度，恒温扩增仅需35分钟，核酸试纸条检测结果需2分钟左右，全程从接受样品到获得结果整个检测过程仅需1小时左右，且整个反应过程只需一个恒温仪器，特别适合基孔肯雅热病毒感染媒介监测的快速检测使用。

主权项

一种基孔肯雅热病毒恒温扩增检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒组成包括：(1)RNA提取试剂；(2)恒温PCR扩增反应液：正向外围引物、反向外围引物、两条探针、两条扩增交叉引物、1×Thermol Buffer，MgSO₄，dNTPs溶液，Bst DNA聚合酶，AMV逆转录酶和无菌双蒸水；所述正向外围引物为：5′‑CTCTCCTCTCCACAGGTGTA‑3′；反向外围引物为：5′‑CGCAGTCTATGGAGATGTGC‑3′；所述两条探针的序列分别为：正向5’端Biotin标记探针5′‑Biotin‑ATGGGAGAAGAAAATATCTGAGGC‑3′；反向3’端Fitc标记探针5′‑Fitc‑TGGTTCAGTGACTGGGTCAG‑3′；所述两条扩增交叉引物分别为：扩增正向引物：5′‑CCGTCGAGTCCATGGCTGTAAAACTCAGGAGGGAAAGACAGG‑3′；扩增反向引物：5′‑GCAGACGTGGTCATCTACTGCC‑ACTTGGGTCCGCATCTGT‑3′；(3)阳性对照：基孔肯雅热病毒核酸；(4)阴性对照：无菌双蒸水。