一种富硒螺旋藻中硒形态测定的方法

摘要

本发明公开了一种富硒螺旋藻中硒形态测定的方法，其通过对富硒螺旋藻样品利用溶菌酶进行破壁处理，然后利用处理过的样品，采用分步连续提取的方式进行酶解，然后将各步酶促反应得到的酶解液过膜后利用HPLC-HG-AFS上机测定硒形态。采用本法对富硒螺旋藻样品测定硒形态，其提取率高，且样品本身的硒形态稳定，反应过程中不会出现硒形态的变化。

主权项

一种富硒螺旋藻中硒形态测定的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）样品的前处理：取经过研磨粉碎的富硒螺旋藻干样，加入缓冲液进行超声提取；（2）样品破壁酶解：对步骤（1）经过前处理的混合物，调节pH值至5‑7，然后向其中加入溶菌酶，酶解；（3）样品酶解，包括以下步骤的其中之一或其依顺序的任意组合：a.将步骤（2）得到的混合物的pH值调节至7.5，加入蛋白酶K，酶解，b.将步骤a酶解后的混合物进行离心分离，取离心后的上清液过0.22μm水系膜待测，将离心后的沉淀部分继续加入缓冲液，调节pH值至7.5，加入蛋白酶XIV，酶解，c.将上一步酶解后的混合物进行离心分离，取离心后的上清液过0.22μm水系膜待测，将离心后的沉淀部分继续加入缓冲液，调节pH值至1.5‑2.5，加入胃蛋白酶，酶解，d. 将上一步酶解后的混合物进行离心分离，取离心后的上清液过0.22μm水系膜待测，将离心后的沉淀部分继续加入缓冲液，调节pH值至7.0~8.0，加入胰蛋白酶，酶解，其中，若步骤b为样品酶解步骤中的第一步，则步骤b为将步骤（2）得到的混合物的pH值调节至7.5，加入蛋白酶XIV，酶解；若步骤c为样品酶解步骤中的第一步，步骤c将步骤（2）得到的混合物的pH值调节至1.5‑2.5，加入胃蛋白酶，酶解；若步骤d为样品酶解步骤中的第一步，步骤d将步骤（2）得到的混合物的pH值调节至7.0~8.0，加入胰蛋白酶，酶解;（4）样品分离：将步骤（3）经样品酶解后得到的混合物，进行离心分离，取离心后的上清液过0.22μm水系膜待测；（5）上机测定：对步骤（3）和（4）中过水系膜后的酶解液采用高效液相色谱法与氢化物发生‑原子荧光光谱法联用上机测定样品中的硒形态。