一种生产香港牡蛎全三倍体的时间点定量处理方法

摘要

本发明公开了一种生产香港牡蛎全三倍体的时间点定量处理方法。本发明通过获取单体精卵、适时处理受精卵、检测幼虫倍性等技术环节，创造了一种以受精卵发育阶段作为生物学指标的时间点定量处理方法，可以获得100％香港牡蛎三倍体。本发明采用单体精卵优选、配对，有效的消除了以往牡蛎三倍体诱导过程中混合精卵同步性差的缺陷，获得的同步性较高的合子。本发明颠覆了传统上以30-50％出现第一极体作为处理时间点，处理20min为最佳时间段的固定思维模式；而是以受精卵发育阶段作为生物学指标，采用A+1/3B作为处理时间点，B+C作为处理时间段，回避了温度等外界环境条件对其处理的影响，可以成功的诱导出香港牡蛎全三倍体。

主权项

一种生产香港牡蛎全三倍体的时间点定量分析方法，其特征在于，包括以下步骤：a、获取单体卵子：在香港牡蛎繁殖季节，以同一个地理群体的作为核心群体，以该核心群体为材料，选取成熟的3‑5龄香港牡蛎雌性个体；以卵子数量和质量双重指标进行选择，挑选出发育整齐，卵子数量≥5000万个，卵膜完整，卵黄积累呈现为深黄色的个体作为雌性亲本；收集单体卵子，在盐度为15‑20ppt海水中浸泡30‑60min，待其生发泡破裂完全后，再用新鲜的盐度为15‑20ppt海水清洗卵子，得到单体卵液；b、获取单体精子：以a步骤中的核心群体为材料，筛选出2‑3龄的雄性个体；之后对其精子质量进行检测，筛选出显微镜下≥30％精子活动的个体，在盐度15‑20ppt海水中激活10‑15min；之后再次镜检，以≥90％精子活动的个体作为雄性亲本，收集单体精子；c、适时处理受精卵：将单体精子加入单体卵液中，控制每个卵子周边有3‑8个精子，卵子密度控制在≤5万个/mL，在此期间，温度控制在25‑32℃，盐度控制在15‑24ppt，其中，从精子加入开始，至发现10％第一极体放出的时间段设置为A，从第一极体至发现10％第二极体放出的时间段设置为B，从第二极体至发现10％卵裂个体的时间段设置为C，选择在(A+1/3B)时间点采用常规方法处理受精卵，抑制受精卵第二极体排放，处理持续时间为(B+C)，完后将其放置于正常海水中孵化，即可以获得香港牡蛎三倍体幼虫。