内源启动子在表达异源蛋白中的用途

摘要

本发明提供了利用内源的转录控制系统调节异源蛋白的表达的方法。具体而言，靶定基因组编辑用于将编码异源蛋白的序列符合读框地与内源的编码序列整合，使得所述异源序列和内源序列的表达通过内源控制系统来调节。

主权项

一种将编码至少一种异源蛋白的序列整合至细胞的染色体中使得所述至少一种异源蛋白的表达通过内源调节系统来调节的方法，所述方法包括：a) 将以下物质引入细胞中：(i)一对锌指核酸酶或编码一对锌指核酸酶的核酸，所述锌指核酸酶能结合靶序列并切割编码肌动蛋白、微管蛋白或核纤层蛋白的靶定染色体序列中的切割位点，其中所述靶序列选自微管蛋白基因的SEQ ID NO：1和2、肌动蛋白基因的SEQ ID NO：3和4或SEQ ID NO：7和8，或者核纤层蛋白基因的SEQ ID NO：5和6；和(ii)包含编码所述至少一种异源蛋白的序列的至少一种供体多核苷酸，所述序列与编码2A肽的序列连接以形成异源蛋白编码序列，所述异源蛋白编码序列被与切割位点任一侧有基本序列同一性的上游序列和下游序列侧接；和(b) 将所述细胞保持在这样的条件下，所述条件使得通过同源性定向的修复过程修复通过锌指核酸酶引入靶定染色体序列中的双链断裂，使得所述供体多核苷酸中的所述异源蛋白编码序列符合读框地整合至靶定染色体序列中，从而所述至少一种异源蛋白的表达通过调节内源蛋白表达的内源调节系统来调节。