双链接头、其应用及构建末端配对DNA文库的方法

摘要

本发明公开了一种提双链接头、其应用及构建末端配对DNA文库的方法。双链接头包括接头A和接头B，接头A和接头B分别包括一个LoxP序列和将LoxP序列同方向地连接到待环化的DNA片段两端的辅助序列。应用本发明的技术方案，基于Cre重组酶/LoxP作用系统特性（当两个LoxP序列位于一条DNA链上，且方向相同，Cre重组酶能有效切除两个LoxP位点间的序列，而切除部分的序列将自动成环形状态而实现DNA长片段的环化）设计的双连接头，通过T-A克隆的方式高效地连接到用于构建末端配对DNA文库的DNA片段的两端，然后采用Cre重组酶体系能够高效的使用于构建末端配对DNA文库的DNA片段环化。

主权项

一种双链接头，其特征在于，包括接头A和接头B，所述接头A和所述接头B分别包括一个LoxP序列和将所述LoxP序列同方向地连接到待环化的DNA片段两端的辅助序列；所述接头A中的所述LoxP序列为正向LoxP序列，所述接头A中的所述辅助序列包括位于所述正向LoxP序列上游的粘性末端，以及位于所述正向LoxP序列下游的具有突出的3’T末端，所述接头A两条链的5’末端第一个碱基分别进行了磷酸化修饰，且所述正向LoxP序列的第32位碱基T进行了生物素标记；所述接头B中的所述LoxP序列为反向LoxP序列，所述接头B中的所述辅助序列包括位于所述反向LoxP序列上游的粘性末端，以及位于所述反向LoxP序列下游的具有突出的3’T末端，所述接头B两条链的5’末端第一个碱基分别进行了磷酸化修饰，且所述反向LoxP序列的第32位碱基T进行了生物素标记；所述接头A的碱基序列如图1所示，所述接头B的碱基序列如图2所示。