一种荧光定量PCR技术筛选耐渍涝花生品种或植株的方法

摘要

本发明公开了一种荧光定量PCR技术筛选耐渍涝花生品种或植株的方法，其包括培养花生幼苗、胁迫处理与样品采集、花生AhGLB序列的应用、筛选等步骤。本发明方法操作简便，不需要模拟自然渍涝条件和各种农艺性状及生理生化指标的检测，周期短，成本低，科学准确，通用性好。

主权项

一种荧光定量PCR技术筛选耐渍涝花生品种或植株的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)培养花生幼苗：选取生长力旺盛的花生种子，用质量分数为65％‑85％的乙醇消毒1‑5分钟后用质量分数0.1％的HgCl₂溶液消毒5‑15分钟，再用无菌dH₂O冲洗3‑4次，置于带有双层滤纸的培养皿中，每个培养皿加dH₂O 20‑50mL，花生种子5‑15粒，25℃人工气候箱中暗培养20‑30h后，设置光照强度1000‑2000LX，每天光照培养12‑16h，培养72h；2)胁迫处理与样品采集：花生幼苗培养10‑20天后分为两组，其中一组进行通气处理的为对照组，另一组进行低氧胁迫处理20‑30h，分别提取对照组与低氧胁迫处理组花生幼苗根的RNA，反转录为cDNA，置于‑80‑‑70℃冰箱中保存备用；3)花生AhGLB序列的应用：对基因进行引物设计，以恒定表达基因Actin作为内参基因对同一样品cDNA模板利用荧光定量PCR仪进行定量分析，引物设计如下：AhGLB‑F：5’‑TGGAGGCAACAGCATTCACT‑3’；AhGLB‑R：5’‑ATGCTTCCTTCATGGCTGGT‑3’；Actin‑F：5’‑GTCCATCAGGCAACTCGTAGC‑3’；Actin‑R：5’‑GCCCTCGACTATGAGCAAGAG‑3’；使用荧光定量PCR仪进行检测，结束后利荧光定量PCR仪自带的SDS 2.0版软件进行结果分析；4)筛选分析。