减少蛋白质糖基化的方法和过程及其蛋白质

摘要

本发明涉及降低由毕赤酵母生产的胰岛素或胰岛素类似物前体分子的O-糖基化水平的方法。本发明通过破坏蛋白甘露糖基转移酶（PMT）基因提供了包括毕赤酵母尤其是巴斯德毕赤酵母的甲醇营养型酵母的基因工程敲除菌株，且使它们能够生产糖基化减少的异源性蛋白质。本发明考虑了用于转化甲醇营养型酵母的载体，这些载体包括PMT1、PMT2、PMT4、PMT5、和PMT6基因的编码序列。本发明的PMT失活菌株已经保藏在MTCC，Chandigarh。这些菌株是PMT1/GS115（MTCC 5515）、PMT4/GS115（MTCC 5516）、PMT5/GS115（MTCC 5517）以及PMT6/GS115（MTCC5518）。

主权项

一种减少式I表示的胰岛素前体的糖基化的方法：X–B–Y–A其中，X是所述胰岛素前体的前导肽序列，B是胰岛素分子B链的氨基酸序列，Y是包括范围为从2至25个氨基酸的连接肽，A是胰岛素分子A链的氨基酸序列，并且所述方法包括通过失活选自包括PMT1、PMT5和PMT6基因的组中的至少一个基因能够从甲基营养型酵母中生产由式I表示的所述胰岛素前体，所述PMT1、PMT5和PMT6基因分别为SEQ ID No.1、4和5表示的核苷酸序列，所述序列编码蛋白甘露糖基转移酶或其功能性部分。