一种从小肠浸出液中提取肝素和硫酸皮肤素的方法

摘要

本发明提供了一种从猪小肠浸出液中获得高纯度肝素和高纯度硫酸皮肤素的方法，本发明以猪小肠粘膜浸出液为原料，通过离子交换层析、透析、旋蒸、有机溶剂沉淀生产高纯度的肝素钠以及高纯度的硫酸皮肤素。通过离子交换层析的分步洗脱得到两步洗脱液，以透析法除盐，经旋蒸浓缩得浓缩液，再进行一步醇沉即得到高纯度肝素与硫酸皮肤素。在离子交换树脂的洗脱中使用了梯度的氯化钠溶液洗脱，从而使肝素和硫酸皮肤素能在不同的洗脱液浓度下分离下来，达到了肝素与硫酸皮肤素的分离，并且分别提高了肝素和硫酸皮肤素的纯度，且效价也有了提高，分子量分布及旋光度均符合药典要求。

主权项

一种从猪小肠浸出液中提取硫酸皮肤素的方法，包括以下步骤：步骤一：称取新鲜猪小肠粘膜，在绞肉机中绞碎，加入重量为猪小肠粘膜重量0.25％的市售胰蛋白酶，37℃搅拌30分钟；加入重量为猪小肠粘膜重量3％的氯化钠，一边搅拌一边加入30％的氢氧化钠溶液，直至pH达到9.0；于55℃保温继续以20rpm速度搅拌2～3小时；升至95℃，保温10分钟，迅速冷却到室温，即得猪小肠粘膜浸出液；将猪小肠粘膜浸出液用2层市售医用纱布过滤，除去大颗粒的不溶物，得澄清的无色液体；加入0.5‑1.5倍体积的去离子水，使猪小肠粘膜浸出液总体积达到稀释1.5～2.5倍，即得到稀释后的猪小肠粘膜浸出液；步骤二：取已填充D254树脂的填充柱，将填充柱固定到常规的层析设备上，填充柱以去离子水清洗2个柱体积；利用蠕动泵以3mL/min的速度将稀释后的猪小肠粘膜浸出液加入D254树脂填充柱，加入稀释后猪小肠粘膜浸出液体积为柱体积的1.5～2.0倍；待猪小肠粘膜浸出液全部加到填充柱后，向填充柱加入2倍柱体积的pH8.5的Tris‑HCl的缓冲液；步骤三：向填充柱加入1.1～1.3mol/L氯化钠溶液，进行第一次洗脱，具体收集体积以298nm吸收峰值下降到洗脱前水平为准，将收集的洗脱液标为洗脱液1；向填充柱加入2.0～2.3mol/L氯化钠溶液，进行第二次洗脱，具体收集体积也以298nm吸收峰值下降到洗脱前水平为准，将收集洗脱液标为洗脱液2；步骤四：先按以下(A)、(B)两种方法中的一种制取浓缩洗脱液1：(A)将步骤三获得的洗脱液1通过1000Da的透析膜，在去离子水中透析除盐，透析18～22h，体积增大45～55％；在55～65℃下旋蒸45min，得到浓缩洗脱液1；(B)采用切向流超滤方法对步骤三获得的洗脱液1进行超滤，当体积减小到原体积的20～22％，得到浓缩洗脱液1；再向所得浓缩洗脱液1中加入分析纯无水乙醇，使乙醇浓度达到40～50％，出现白色沉淀物，通过离心，去除上清，将沉淀在60℃烘箱中放置过夜，获得纯度为85～89％的硫酸皮肤素。