一种利用茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶促合成茶黄素TF的方法

摘要

一种利用茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶促合成茶黄素TF的方法，该方法是以茶多酚氧化酶同工酶PPO1为酶源，以茶多酚中的儿茶素EC和EGC组分为主要反应底物，以一定pH值的缓冲液作为反应体系，经摇床振荡酶促反应以及后续的萃取、离心、浓缩、冷冻干燥等步骤，定向酶促合成单一茶黄素组分TF(theaflavin)的技术及工艺优化。该方法克服了传统以茶叶多酚氧化酶粗酶液酶促合成茶黄素中同时产生多种茶黄素组分、分离纯化茶黄素组分工艺技术繁琐以及制备高纯茶黄素组分难度大等缺陷，实现了酶促合成产物单一、反应终端无副产物的技术创新，避免了茶黄素组分后续分离纯化的技术瓶颈，为茶黄素组分绿色、安全、高效大规模工业化生产与利用奠定了理论和实践依据。

主权项

一种利用茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶促合成茶黄素TF的方法，其特征在于：该方法步骤如下：1)以茶多酚溶液为底物，以酶活力为4340U/ml的茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶液为酶源，按1:500‑800的体积比将茶多酚氧化酶同工酶PPO1酶液加入到质量体积浓度为1.2％‑3％的茶多酚溶液中；2)以空气作为酶促合成的氧气来源，于20‑44℃、60‑150r/min摇床振荡下酶促反应30‑60min，得酶促反应液；3)于上述酶促反应液中，加入等体积的分析纯乙酸乙酯，静置萃取5‑30min，离心取乙酸乙酯层溶液，对无机相溶液重复萃取及离心一次，合并乙酸乙酯层溶液，真空浓缩回收乙酸乙酯，冷冻干燥，即可。