一种制备纯化抗肿瘤溶栓双效嵌合蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种制备纯化抗肿瘤溶栓双效嵌合蛋白的方法。将重组菌接种于新鲜LB培养基中，摇瓶培养至OD值为0.5-0.6；加入诱导剂，于30-37℃下诱导4-8h，离心，将沉淀于-20℃冷冻后，用平衡缓冲液将沉淀悬起，加溶菌酶，破碎菌体，离心，收集上清液；滤膜过滤上清液，经Ni-NTA亲和层析柱纯化后，得到带组氨酸标签的抗肿瘤溶栓双效嵌合蛋白溶液；用蒸馏水稀释，超滤除盐，再用肠激酶缓冲液稀释，再超滤浓缩，最后用肠激酶酶切去除组氨酸标签，再经过Ni-NTA亲和层析柱得到纯化的抗肿瘤溶栓双效嵌合蛋白。本发明能得到大量抗肿瘤溶栓双效融合蛋白，为其将来在治疗肿瘤及溶栓方面发挥重要作用奠定了基础。

主权项

一种制备纯化抗肿瘤溶栓双效嵌合蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：1)取含有抗肿瘤溶栓双效嵌合蛋白基因的重组菌，按1‑2％的接种量接种于新鲜LB培养基中，摇瓶培养至OD值为0.5‑0.6；2)加入诱导剂，于30‑37℃下诱导4‑8h，8000rpm，离心10min，将沉淀于‑20℃冷冻10‑14h后，用平衡缓冲液将沉淀悬起，加入溶菌酶，用细胞超声粉碎仪破碎菌体，8000rpm，离心10min，收集上清液；3)用0.45um的过滤膜对上清液过滤，经Ni‑NTA亲和层析柱纯化后，得到带组氨酸标签的抗肿瘤溶栓双效嵌合蛋白溶液；4)将带组氨酸标签的抗肿瘤溶栓双效嵌合蛋白溶液用蒸馏水稀释，超滤除盐后，再用肠激酶缓冲液稀释，再超滤浓缩，最后用肠激酶酶切去除组氨酸标签，再经过Ni‑NTA亲和层析柱得到纯化的抗肿瘤溶栓双效嵌合蛋白。