一种条斑紫菜抗菌肽的纯化方法及其氨基酸序列

摘要

本发明公开了一种条斑紫菜抗菌肽的纯化方法，该方法包括条斑紫菜水溶性蛋白质的初步纯化、水溶性蛋白质II的酶解与分子量分级、抗菌肽纯化及抗菌肽序列分析等步骤。本发明对条斑紫菜中水溶性蛋白质经过饱和度为30～50％硫酸铵盐析分级获得水溶性蛋白质II，再经胃蛋白酶降解、超滤分级获得分子量＜5KD级分，先上Sephadex G-25层析柱，蒸馏水洗脱，洗脱曲线峰2组分上Sephadex C-25层析柱继续纯化，洗脱曲线峰2组分冻干即得抗菌肽TPDSEAL，该抗菌肽对金黄色葡萄球菌具有强抑制作用。本发明纯化方法简便快捷，可用于以我国资源丰富的条斑紫菜为原料制备抗菌肽，对条斑紫菜的高值化利用具有重要意义。

主权项

一种条斑紫菜抗菌肽的纯化方法及其氨基酸序列，包括如下步骤：条斑紫菜水溶性蛋白质的初步纯化：先将条斑紫菜水溶性蛋白质溶液以30％饱和度硫酸铵沉淀，离心去除沉淀，上清液硫酸铵饱和度调至50％，再离心，将沉淀经透析除盐，制成水溶性蛋白质II冻干粉；水溶性蛋白质II的酶解与分子量分级：将水溶性蛋白质II以适量蒸馏水溶解后以胃蛋白酶降解，胃蛋白酶使用量为水溶性蛋白质II质量的1/1000，介质pH1.5，在40℃酶解2小时，将酶解液超滤，保留分子量＜5KD级分并冻干保存；抗菌肽纯化：取分子量＜5KD级分适量以蒸馏水溶解后上Sephadex G‑25层析柱，蒸馏水洗脱，控制流速0.7mL/min，每4分钟收集1管，洗脱结束后，分别在220nm和280nm下比色得洗脱曲线，将峰2冻干得肽样品A；取A适量上Sephadex C‑25层析柱，分别在220nm和280nm下比色得到洗脱曲线，将峰2冻干得肽样品B；抗菌肽序列分析：对肽样品B进行混合质谱测序数据采集和数据分析，确定肽段氨基酸序列为：TPDSEAL。