麻保沙星快速检测试纸卡及制备方法

摘要

本发明涉及一种麻保沙星快速检测试纸卡及制备方法，试纸卡包括外壳和试纸芯，试纸芯包括底板和底板上的样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，胶体金标记垫吸附有麻保沙星的特异性抗体，检测反应区设有麻保沙星偶联载体蛋白溶液印制的检测印迹，以及用羊或（兔）抗小鼠IgG、或羊抗兔IgG溶液印制的对照印迹；麻保沙星特异性抗体为胶体金标记的麻保沙星单克隆抗体或多克隆抗体。制备时底座和面板嵌合在一起，面板上检测窗与试纸芯检测反应区对应，加样孔与试纸芯样品垫对应。该试纸卡特异性强、敏感性高，检测简便、快速、时效性强，结果显示形象、直观、准确，检测费用低，适用范围广，便于推广。

主权项

一种麻保沙星快速检测试纸卡，含有外壳和位于外壳内的试纸芯，试纸芯包括底板，底板上依次固定黏贴有样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，其特征是：所述胶体金标记垫吸附有麻保沙星的特异性抗体，所述检测反应区设有麻保沙星偶联载体蛋白溶液印制的隐形检测印迹，以及用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG溶液印制的隐形对照印迹；所述麻保沙星特异性抗体为胶体金标记的麻保沙星单克隆抗体或多克隆抗体；所述麻保沙星偶联载体蛋白溶液是由以下方法制备的：称取2 mg 麻保沙星溶解于500 µL 的DMF溶剂中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室温避光反应24h，得到活化的麻保沙星液；称取载体蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13 的mol/L 的PBS溶液中，将活化的麻保沙星液逐滴加入载体蛋白溶液中，密封避光于室温下搅拌4h；将反应产物置于4℃层析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天，离心除去沉淀，得到麻保沙星载体蛋白的偶联物，分装，‑20℃保存，备用；胶体金标记的麻保沙星抗体由以下方法制备：在沸腾的200mL 0.01～0.02％氯金酸溶液中加入新鲜配制的1％柠檬酸钠8mL，获得直径为10‑20nm的胶体金溶液，用0.1mol/L 的K₂CO₃调pH值至8.5～9.5，置2～8℃保存，备用；以1：2000的标记比将待标记的麻保沙星单克隆抗体或多克隆抗体加入pH8.5～9.5的金溶胶中，标记10min后加入20％的PEG10000至终浓度为0.05％，4℃、1500～3000rpm离心20min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、15000rpm离心1h，弃上清，获初步纯化的胶体金标记物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S‑400柱层析进行分离纯化，获得麻保沙星胶体金标记抗体。