一种食蟹猴TRIM5alpha基因敲低的方法

摘要

本发明公开了一种食蟹猴TRIM5alpha基因敲低的方法，属于生物技术领域。本发明所述的食蟹猴TRIM5alpha基因敲低的方法，包括以下步骤：1)针对食蟹猴TRIM5alpha基因的mRNA确立靶序列；2)对于每个位点合成相应的shRNA；3)包装相应的慢病毒；4)转染食蟹猴胚胎成纤维细胞，获得食蟹猴TRIM5alpha基因敲低的细胞。本发明经敲低效果检测鉴定，敲低效果达到90％以上，为建立艾滋病动物模型奠定了坚实基础。

主权项

一种食蟹猴TRIM5alpha基因敲低的方法，其特征在于：针对食蟹猴TRIM5alpha基因的3个敲低靶序列，对于每个靶点合成相应的shRNA，包装相应的慢病毒，转染食蟹猴胚胎成纤维细胞，TRIM5alpha基因敲低的效果可达90％以上；具体步骤如下：1)针对食蟹猴TRIM5alpha基因的mRNA序列确立靶序列；根据食蟹猴TRIM5alpha基因的mRNA序列，确立3个靶序列，均位于TRIM5alpha基因的SPRY区域；靶点1的序列如SEQ ID NO：1所示，靶点2的序列如SEQ ID NO：2所示，靶点3的序列如SEQ ID NO：3所示；2)对于每个靶点合成相应的shRNA；靶点1的上游引物序列如SEQ ID NO：4所示；靶点1的下游引物序列如SEQ ID NO：5所示；靶点2的上游引物序列如SEQ ID NO：6所示；靶点2的下游引物序列如SEQ ID NO：7所示；靶点3的上游引物序列如SEQ ID NO：8所示；靶点3的下游引物序列如SEQ ID NO：9所示；对上述3对引物对进行退火处理，使单链的DNA退火为shRNA；3)包装相应的慢病毒；4)感染食蟹猴胚胎成纤维细胞，获得食蟹猴TRIM5alpha基因敲低的食蟹猴胚胎成纤维细胞。