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Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Nachweis wenigstens eines Zielanalyten in einer Probe, wobei A) ein an eine feste Oberfläche immobilisierter Komplex ausgebildet wird, umfassend a) ein Fänger-Bindemolekül, das den Zielanalyten spezifisch bindet; b) den nachzuweisenden Zielanalyten; c) ein Reporter-Bindemolekül, wobei das Reporter-Bindemolekül (aa) ein Bindemolekül und (bb) eine daran gebundene doppelsträngige Reporter DNA aufweist, wobei die Reporter DNA in zumindest einem ihrer Stränge i) eine erste Sequenz mit einer Erkennungssequenz für eine Nicking-Endonuklease aufweist, und ii) 3' davon eine zweite Sequenz aufweist, die als für das Reporter-Bindemolekül spezifischer Sequenz-Tag dient; B) der gebildete Komplex gewaschen wird; und C) eine Nicking-Endonuklease und eine Polymerase, die eine Strang-Verdrängungs-Aktivität aber keine 5' nach 3 Exonuklease-Aktivität aufweist, zugegeben wird und eine isothermale Amplifikation des Sequenz-Tags erfolgt, indem wiederholt die Nicking-Endonuklease ihre Erkennungssequenz erkennt und einen Nick in die erste Sequenz der Reporter DNA einführt, so dass ein freies 3' OH Ende erzeugt wird, das 5' des Sequenz-Tags liegt und der Nick durch die Polymerase mit zum Gegenstrang komplementären Nukleotiden unter gleichzeitiger Verdrängung des Sequenz-Tags aus dem Doppelstrang aufgefüllt wird; D) der verdrängte Sequenz-Tag detektiert wird, wodurch der Nachweis des Zielanalyten in der Probe erfolgt. Ferner werden Kits und Systeme zur Durchführung des Verfahrens bereitgestellt. |
