一种用于隐蔽态T-2毒素富集净化的免疫磁珠的制备方法

摘要

本发明涉及一种用于隐蔽态T-2毒素富集净化的免疫磁珠的制备及应用，它是以羧基磁珠为载体，抗T-2毒素母核多克隆抗体为识别中间体，经过活化-偶联-洗涤-封阻的过程制备出抗T-2毒素母核多克隆抗体免疫磁珠，在合适的缓冲液中于一定条件下孵育可以高效捕捉、富集检测样本中的隐蔽态T-2毒素。该方法特异性强，高效快速，操作简单，价格低廉，不需要大型仪器和特殊培训的专业操作人员，样品不需要特殊前处理，可广泛应用于食品、饲料及动物机体内隐蔽态T-2毒素的富集分离与检测。

主权项

一种用于隐蔽态T‑2 毒素富集的T‑2 毒素母核抗体免疫磁珠的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：以500nm 粒径的羧基磁珠为载体，羧基磁珠末端具有有反应活性的羧基基团，在经适量活化剂EDC‑NHS 组合处理后，活化磁珠可与抗T‑2 毒素母核的多克隆抗体进行偶联，制备成能够富集隐蔽态T‑2 毒素的免疫磁珠；具体方法为：（1）清洗: 分别取0.4mg 羧基磁珠于2mL 离心管中，500μL PBT 洗2次，洗涤后用250μLPB 缓冲液超声分散重悬；（2）活化: 分别加入250μL 用PB 缓冲液配制的活化剂 EDC 和NHS，37 ℃活化2h，保持悬浮状态；（3）偶联: 磁分离，吸去上清液， PBT 缓冲液洗涤3次，超声重悬，再分别将200μg的T‑2 毒素母核抗体加入到已活化磁珠中，37 ℃偶联3h，15r/min 旋转保持悬浮状态；（4）封闭: 磁分离，取出上清液，加入100μL 的乙醇胺溶液和BSA 封闭液，37 ℃封闭2h，保持悬浮状态；（5）保存: 用PBT 洗涤磁珠3 次，磁分离，弃上清液，用250μL PB 重悬，存于4 ℃；所述的 PBT 浓度为0.02 mo1/L，pH 7.4，含0.05%吐温‑20；所述的 PB 缓冲液浓度为0.02 mo1/L，pH 7.4；所述的活化剂 EDC 和NHS，浓度均为1‑5 mg/mL，用活化缓冲液PB 溶解，添加顺序为先加入EDC，混匀后加入NHS，震荡均匀；所述的BSA封闭液为以 PB 缓冲液配制5%BSA 溶液。