鹿胎DNA鉴定试剂盒及鉴定方法

摘要

本发明涉及中药检测技术领域，是一种鹿胎DNA鉴定试剂盒及鉴定方法。一种鹿胎DNA检测试剂盒包括线粒体DNA提取体系，PCR反应体系，结果观察体系三部分组成。一种鹿胎DNA鉴定方法，包括检测样本前处理，线粒体DNA提取，PCR引物设计与合成，建立PCR反应，结果判定五步。判断标准为出现563bp条带为正品鹿胎，只出现多条或不出现均为伪品鹿胎本发明建立的PCR鉴定方法具有简便、快速、检测结果可靠等优点，能够准确同时区别鉴别鹿胎和伪品的特异性。

主权项

一种鹿胎DNA检测试剂盒，其特征是，它包含样本前处理液 、线粒体DNA提取体系、PCR反应体系、结果观察体系:（1）样本前处理液（a）前处理液：去离子水；（b）处理液：主要含有蔗糖，Tris‑HCl，Na₂EDTA；（2）线粒体DNA提取体系（a）裂解液：10 m mol/LTris‑HCl (pH 8.0), 10 m mol/LEDTA (pH 8.0), 100 m mol/L NaCl, 2% SDS, 40μg/ml蛋白酶K,0.039 mol/L DTT；（b）沉淀液：饱和NaAC；（c）洗涤液：70%乙醇；（3）PCR反应体系（a）鉴定反应体系  总体系为100μL，其中含有缓冲液 10μL，12.5 mM dNTP4～10μL，0.1mM鹿胎引物1.5～4.0μL，Taq DNA聚合酶2～10μL，待测样品DNA2～5μL，余为双蒸馏水；(b)阳性对照反应体系  总体系为100μL，其中含有缓冲液 10μL，12.5 mM dNTP 4～10μL，0.1mM鹿胎引物1.5～4.0μL，Taq DNA聚合酶2～10μL，鹿胎DNA 2～5μL，余为双蒸馏水；(c)阴性对照反应体系  总体系为100μL，含有缓冲液 10 μL，12.5 mM dNTP4～10μL，0.1 mM鹿胎引物1.5～4.0μL，Taq DNA聚合酶2～10μL，余为双蒸馏水；（d）设计反应程序  分别将鉴别鹿胎和伪品PCR检测试剂盒的（a）鉴定反应体系、（b）阳性对照反应体系和（c）阴性对照反应体系的总体系各100μL加入反应管中，置于PCR反应仪（市场有售，任意型号）中按下列程序进行: 94℃预变性3min～7 min，94℃ 30s，退火温度58℃ 1min～30s，72℃ 1min～30s，30个循环，72℃延伸5min～8min，4℃；（4）结果观察体系（a）琼脂糖凝胶：1.5% 琼脂糖；（b）标准分子量：100bp～1500bp的DNA Marker（可以选用其它种类的标准分子量，要求最大的不能超过2000bp，要含有1000bp和500bp）。