基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器及其制备方法

摘要

本发明涉及一种基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器及其制备方法，本发明通过Primer的不断产生和循环利用来实现信号的放大，从而实现鼠伤寒沙门氏菌的高灵敏检测，并获得较低的检测下限。本发明制备的生物传感器特异性和灵敏度高、成本低、检测速度快的基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器。通过这种检测方法，沙门氏菌检测限在5-15cfu/mL，检测范围是1×10-1×10⁷cfu/mL。

主权项

一种基于核酸适配体检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器，其特征在于，由以下方法制备而成：（1）对电极进行预处理，取金电极，在0.3和0.05 µm的氧化铝浆中进行抛光处理，直到呈镜面，用PBS和二次水冲洗；（2）将10 μM的HAP2取10 μL滴加到经过预处理的电极表面，在37℃下孵育2 h；（3）将灭菌水，Aptamer、Primer和待测目标物加入离心管中，震荡30s，放入37℃的恒温箱中孵育1h；再将10×的buffer缓冲液、HAP1、Helper、dNTP、聚合酶和内切酶加入以上离心管中，震荡30 s，放入37℃的恒温箱中孵育2h；将孵育好的混合溶液滴加到修饰好HAP2层的电极上，将电极继续放在37℃的恒温箱中孵育2 h，清洗；所述的HAP1、HAP2、Primer、Aptamer、Helper、聚合酶、连接酶和dNTP的摩尔与活性的比为1：10：1：1：1：40：40：2；所述聚合酶为Phi29DNA聚合酶；所述内切酶为Nt.BsmAI内切酶；HAP1 的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；HAP2的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；Primer的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；Aptamer的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；Helper的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。