一种芒果组织RNA的提取方法

摘要

本发明属于生物化学技术领域，具体的说是涉及一种芒果组织RNA的提取方法。本发明的提取方法用LiCL溶液替代现有技术中的醋酸钾溶液，结合乙醇进行第二次分离沉淀RNA，结果对RNA选择性沉淀效果好，大大减少了无效沉淀对RNA产物的干扰，纯度和得率都大大提高，提高了芒果叶片RNA的提取质量和成功率。

主权项

一种芒果组织RNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取0.5g芒果叶片放入研钵内，加入0.05g聚乙烯吡咯烷酮，用液氮将芒果叶片研磨成粉末，将其转移至2mL离心管中，用丙酮溶液洗涤2‑3次，每次洗涤后12000r/min 4℃离心5min，弃去丙酮，将收集有沉淀的离心管置于冰上开口干燥5‑10min，得到干燥后的沉淀；(2)在步骤(1)所得沉淀中加入600μL提取缓冲液，室温下振荡充分混匀；加入150μL无水乙醇，66μL 5mol/L的乙酸钾，振荡充分混匀；加入800μL苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，12000r/min 4℃离心抽提2次，弃去沉淀，获得上清液即为RNA粗提取液；(3)在RNA粗提取液中加入LiCL溶液至终浓度，‑20℃过夜沉淀RNA，12000r/min 4℃离心10min收集沉淀，再用3mol/L LiCL洗涤沉淀2次，每次洗涤后均用12000r/min 4℃离心10min收集沉淀；(4)用DEPC处理水溶解沉淀，加入LiCL溶液至终浓度，再加入2倍体积的无水乙醇，于‑20℃过夜沉淀RNA；用75％乙醇和无水乙醇各洗涤1次，每次洗涤后用12000r/min 4℃离心10min收集RNA沉淀；将收集有RNA沉淀的离心管开口倒置干燥2‑4min除去乙醇，用30μL DEPC处理水溶解RNA沉淀并保存于‑80℃冰箱，备用。