一种古代丝织品的检测方法

摘要

本发明公开了一种古代丝织品的检测方法，采用免疫荧光的方法对古代丝织品进行了检测，将兔抗丝素蛋白抗体浸渍于文物样表面，洗涤干净后，加入绿色荧光素标记的山羊抗兔IgG（H+L）抗体，形成抗原-一抗-二抗复合物，然后洗涤干净将文物样放在激光共聚焦显微镜下观察。可根据样品有没有发出绿色荧光进行定性分析。本发明采用免疫荧光的方法对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面能够避免来自其它蛋白的干扰，特异性强。

主权项

一种古代丝织品的检测方法，其特征在于采用如下步骤：a）pH 7.4的PBS缓冲溶液配制：KCl 0.2g，KH₂PO₄ 0.27g，NaCl 8.0g，Na₂HPO₄ 1.42g，用800mL蒸馏水溶解并定容至1000mL，调节pH至7.4；pH 9.6的碳酸盐缓冲溶液配制：Na₂CO₃ 0.15g，NaHCO₃ 0.29g，用800mL蒸馏水溶解并定容至1000mL，调节pH至9.6；缓冲甘油的配制：将pH 9.6的碳酸盐缓冲溶液和丙三醇按照体积比1:1混合而成；b）取三块大小一致的文物样，放置于打孔皿中，分别标记为A，B，C；用pH 7.4的PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净；分别向A中加入10‑50μL用质量浓度为1%的牛血清白蛋白溶液10‑200倍稀释的兔抗丝素蛋白抗体，C中加入10‑50μL pH7.4的PBS溶液；B不作处理，分别将A、B、C放置于4℃冰箱中12h；然后分别加入2mL pH 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min，洗涤三次，每次三分钟；c）分别向A、B中加入10‑50μL用质量浓度为1%的牛血清白蛋白溶液50‑500倍稀释的绿色荧光素标记山羊抗兔IgG抗体，C中加入10‑50μL pH 7.4的PBS溶液；然后分别将A，B，C放置于底层铺有湿毛巾的盒子中，用锡箔纸将盒子密封，37℃避光孵育0.5‑2h；然后分别加入2mL pH 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；d）分别向A，B，C中加入10μL的缓冲甘油进行封片；e）将A，B，C放置于激光共聚焦显微镜下进行观察；若B，C未发出绿色的荧光，而A发出了绿色的荧光，说明文物样与兔抗丝素蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为丝织品。