一种肝型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒及其制备方法

摘要

本发明公开了一种肝型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒及其制备方法，属于肝型脂肪酸结合蛋白含量的检测技术领域。试剂盒由彼此独立的试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成；其中，试剂Ⅰ的组分包括：缓冲液、防腐剂、表面活性剂和水；所述的试剂Ⅱ的组分包括：包被肝型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒、缓冲液、助悬剂、防腐剂、表面活性剂和水。采用本发明的技术制备的肝型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒具有操作简单、定量准确、灵敏度高、特异性好、检测范围广等诸多优良的特性，适合于肝型脂肪酸结合蛋白临床检测的推广和应用。

主权项

一种肝型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成，所述试剂Ⅰ的组分和每1升所述试剂Ⅰ中各组分的用量为：2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸     20g叠氮化钠               3g吐温20                 2mL所述的试剂Ⅱ的组分和每1升试剂Ⅱ中各组分的用量为：制备所述包被肝型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒溶液包括以下步骤：(1)取0.5mL粒径为200nm的10％浓度的聚苯乙烯胶乳颗粒于50mL离心管中，向离心管中加入4.5mL 0.12mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液，离心得胶乳微球颗粒，用去离子水重复洗涤两次胶乳微球颗粒，后用5mL浓度为0.12mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液重悬胶乳微球颗粒；向胶乳微球颗粒溶液中加入1.0mL的0.02mol/L的6‑氨基己酸溶液，再加入2mg EDC，在室温下搅拌反应30分钟，离心并倾去上清液，制成接有氨基乙酸基团的羧化聚苯乙烯胶乳微球颗粒，并用5mL浓度为0.12mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液重悬胶乳微球颗粒，得到羧化改性的聚苯乙烯胶乳微球颗粒溶液；(2)将100ug兔抗人肝型脂肪酸结合蛋白多克隆抗体冻干品，加入0.2mL去离子水溶解，取100uL溶液，用5mL浓度为0.12mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液稀释后，加入(1)步所得的胶乳微球颗粒溶液中，再加入2mg EDC，在4℃搅拌反应7小时，加入0.2mL 0.1mol/L的甘氨酸缓冲液搅拌反应30min后终止反应，离心弃去上清，用20mL pH7.0的MES缓冲液洗涤1次，后用1mL pH7.0的MES缓冲液分散成乳白色混悬液，得到包被肝型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒溶液；所述试剂Ⅰ和试剂Ⅱ的的pH值为7.0。