一种利用生物反应器生产猪传染性胃肠炎病毒的方法

摘要

本发明提供一种利用生物反应器生产猪传染性胃肠炎病毒的方法，包括如下步骤：1)制备单层传代细胞；2)制备猪传染性胃肠炎病毒生产用种毒；3)将步骤1)制备的单层传代细胞制备成细胞悬液，接种到生物反应器内，使传代细胞在生物反应器中的微载体上吸附培养；4)当传代细胞长至微载体的80％-90％，空球率低于5％，满球率大于80％，细胞计数达到3-5×10⁶个/mL以上时，以2-5％的接种量接种步骤2)制备的种毒，进行病毒的吸附培养；4)当微载体上的传代细胞80％以上病变时，收获病毒液。本发明方法可解决生产效率低、产品质量不稳定、病毒效价低的问题，可提高病毒单位培养效价5-10倍，全面提升疫苗质量和产量，提高疫苗的安全性。

主权项

一种利用生物反应器生产猪传染性胃肠炎病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备单层传代细胞；2)制备猪传染性胃肠炎病毒生产用种毒，具体包括如下步骤：用病毒培养液将猪传染性胃肠炎病毒种毒按2‑5％比例接种到单层传代细胞中进行培养，至细胞80％以上病变时收获病毒液；再将此病毒液作为种毒，在细胞上进行细胞适应性连续传代复壮，每次传代产物进行病毒TCID₅₀和无菌检测，传至病毒TCID₅₀稳定且达到 10⁷TCID₅₀/mL以上时停止复壮，作为生产用种毒；3) 在细胞悬液接种到生物反应器之前，按生物反应器总体积的50‑70％加入无菌细胞生长液，且每升无菌细胞生长液中按4‑10g/L浓度加入微载体，启动生物反应器，低转速搅拌20‑50分钟；将步骤1)制备的单层传代细胞用EDTA‑胰酶消化液进行消化后，用细胞生长液进行悬浮，制备成细胞密度为1‑3×10⁵个/mL的细胞悬液，接种到生物反应器内，使传代细胞在生物反应器中的微载体上吸附培养，所述的EDTA‑胰酶消化液为含有质量体积分数为  0.05％‑0.25％的胰酶和0.02％的 EDTA的Hank’S液，所述的细胞生长液的配方为：质量分数为95％‑98％MEM液、2％‑5％牛血清、终浓度为100‑200IU/mL的抗菌素，pH值为6.8‑7.5，生物反应器设定的参数为：培养温度35‑38℃、pH值6.8‑7.5、溶氧 50％‑70％、搅拌速度50‑80rpm；4)当传代细胞长至微载体的80％‑90％，空球率低于5％，满球率大于80％，细胞计数达到3‑5×10⁶个/mL以上时，以2‑5％的接种量接种步骤2)制备的种毒，进行病毒的吸附培养；5)当微载体上的传代细胞80％以上病变时，收获病毒液。