蒲公英小分子糖蛋白的制备方法

摘要

本发明公开了一种具有抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备方法，包括以下步骤：步骤一、对蒲公英根搅拌提取。步骤二、对蒲公英根提取并进行初步纯化得到蒲公英小分子糖蛋白提取物。步骤三、对蒲公英小分子糖蛋白进行进一步纯化。步骤四、检测蒲公英小分子糖蛋白的抗氧化活性。本发明由于采用了对蒲公英根干粉搅拌提取并纯化的技术手段，所以使一定抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备工艺更简单方便，且对蒲公英蛋白质的提纯效果更好，具有很好的应用前景。

主权项

一种具有抗氧化能力的蒲公英小分子糖蛋白的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：步骤一、对蒲公英根搅拌提取；步骤二、对蒲公英根提取并进行初步纯化得到蒲公英小分子糖蛋白提取物；步骤三、对蒲公英小分子糖蛋白进行进一步纯化；步骤四、检测蒲公英小分子糖蛋白的抗氧化活性；取蒲公英根，80℃烘干恒重，粉碎过80目筛；称取蒲公英干粉，以水为提取溶剂，按照物料比1∶16的比例于80℃下搅拌提取；提取及初步纯化工艺为向三角烧瓶中加入80℃左右的水，然后移至恒温水浴锅上，保持提取温度80℃回流提取4h，提取1次；在70‑80℃下减压浓缩总体积至1/4，加入活性炭使其最终浓度为0.5％，室温搅拌脱色30分钟，6000r·min^‑1离心10min取上清液弃沉淀；再加入三氯乙酸使其浓度为3％，摇匀、静置过夜，6000r·min^‑1离心10min，取上清液弃沉淀；用截留分子量为14000Da的透析袋搅拌透析48小时，然后浓缩透析袋外样品至1/5体积，加入酒精使酒精最终浓度为70％，醇沉过夜；然后6000r·min^‑1离心10min，弃上清液，沉淀即为蒲公英小分子糖蛋白提取物；蒲公英小分子糖蛋白的纯化工艺是取的蒲公英小分子糖蛋白提取液配制糖蛋白浓度为10％的溶液，按质量比多糖∶树脂1∶30上DEAE‑52离子交换柱；然后用无离子水洗脱至洗脱液加硫酸蒽酮试剂不变色为止，再用4个柱体积0.2mol·L^‑1的NaCl洗脱，收集洗脱液；洗脱液过SephadexG‑50柱子进行脱盐，280nm下接取所有蛋白峰混合，真空冷冻干燥，即为蒲公英小分子糖蛋白纯品；蒲公英小分子糖蛋白的抗氧化活性是通过Fenton氧化法和邻苯三酚自氧化分别检测其对羟基自由基和超氧阴离子的清除能力发现，蒲公英小分子糖蛋白具有Vc相当的对羟基自由基和超氧阴离子的清除能力。