多组分同时定量分析的均相发光免疫分析方法及其所使用的试剂盒

摘要

本发明提供一种多组分同时定量分析的均相发光免疫分析方法及其所使用的试剂盒，该方法采用含有多种不同荧光素的受体微球，同时也包被捕获不同待测生物标志物的抗体分子。在测定过程中，待测样本中的多种生物标志物分别与检测体系中相应的受体微球表面的抗体分子和生物素化抗体形成双抗体夹心复合物，再分别连接标记有链霉亲和素的供体微球；用激发光照射供体微球时，使各种类的受体微球发出不同波长光学信号，分别检测不同波长光的强度即可对待测生物标志物进行准确定量。试剂盒包括含有化学发光剂和荧光素的受体微球、生物素化抗体和含有光敏物质的供体微球。本发明的有益效果是实现了多组分同时定量测定，节省检测成本。

主权项

多组分同时定量分析的均相发光免疫分析方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)试剂准备：①取多组含有化学发光剂和荧光素的受体微球，每组受体微球中的化学发光剂相同，但荧光素种类不同，每种荧光素均可被紫外光激发并发出不同波长的光学信号；每组受体微球分别包被能捕获不同待测生物分子的抗体；②用生物素标记不同种类的抗体，制备生物素化抗体；其中每组包被抗体的受体微球均具有与其对应的同类生物素化抗体；③供体微球中含有光敏物质，该供体微球偶联链霉亲和素分子，作为通用试剂；(2)检测体系中加入步骤⑴中的受体微球和生物素化抗体，加入待测样本，待测样本中如果含有能被检测体系中受体微球所包被的抗体所捕获的待测生物分子，则该待测生物分子将分别与检测体系中相应的受体微球上包被的抗体和生物素化抗体结合形成双抗体夹心复合物；待测样本中如果不含能被检测体系中受体微球所包被的抗体所捕获的待测生物分子，受体微球和生物素化抗体将仍处于游离状态；(3)将步骤⑴中的供体微球加入检测体系中，此时供体微球上的链霉亲和素分子与体系中的生物素结合，如果此时体系中存在双抗体夹心复合物，将形成供体微球‑链霉亲和素‑生物素‑抗体‑待检生物分子‑抗体‑受体微球复合物；(4)激发光照射供体微球，供体微球上的光敏剂将周围环境中的氧气转化为更为活跃的单体氧，如果此时检测体系中存在供体微球‑链霉亲和素‑生物素‑抗体‑待检生物分子‑抗体‑受体微球复合物，则单体氧扩散至受体微球，与受体微球上的化学发光剂反应，进一步激活了同样在受体微球上的荧光素，使之发出一定波长的荧光；如果体系中没有复合物存在，则不会有荧光信号产生；(5)用光学仪器分别检测体系中发出的每种光信号，每种光信号强度分别对应一种待测物质的分子浓度。