促进畜禽生长的GM-CSF基因与SS基因共表达DNA疫苗pIRES-GM-CSF/2SS的方法

摘要

本发明公开了一种促进畜禽生长的GM-CSF基因与SS基因共表达DNA疫苗pIRES-GM-CSF/2SS的方法，涉及动物医药生物工程领域。该方法是选择共表达载体pIRES，将GM-CSF与SS基因分别插入pIRES 载体的MCS A和MCS B两个多克隆位点，构建GM-CSF基因与SS基因共表达DNA疫苗。pIRES-GM-CSF/2SS疫苗采用一次注射，它能同时表达出SS和GM-CSF两个完全独立的GM-CSF和SS蛋白，它利用基因佐剂GM-CSF对生长抑素基因疫苗进行免疫调节，从而减少了工作量及对免疫动物的应激影响，能保持独立的免疫原性，增强了免疫效果。该疫苗可作促进畜禽生长用。

主权项

一种促进畜禽生长的GM‑CSF基因与SS基因共表达DNA疫苗pIRES‑GM‑CSF/2SS的方法，其特征在于：具体步骤如下：A、将pIRES质粒用Nhe I和EcoR I进行双酶切，以pVGS/2ss‑asd质粒为模板，PCR获取猪GM‑CSF基因，胶回收GM‑CSF基因与T载体进行连接反应，构建阳性重组质粒pIRES‑GM‑CSF；B、以pVGS/2ss‑asd质粒为模板，用Nhe I 和Hind Ⅲ进行双酶切，PCR获取猪SS基因，用Not I和Sal I进行双酶切与T载体进行连接反应，构建T2SS质粒；C、采用NotI和SalI内切酶分别酶切pIRES‑GM‑CSF质粒和T2SS质粒，将纯化、回收的pIRES‑GM‑CSF大片段和2SS片段进行连接反应，构建真核表达质粒pIRES‑GM‑CSF/2SS，得到DNA疫苗pIRES‑GM‑CSF/2SS。