一种检测或诊断前列腺癌的试剂盒

摘要

本发明提供一种检测或诊断前列腺癌的试剂盒，其包含δ-catenin的吸附抗体、包被缓冲液、洗涤缓冲液、封闭缓冲液、δ-catenin的检测抗体、酶标抗体。或包含δ-catenin的吸附抗体、包被缓冲液、洗涤缓冲液、封闭缓冲液、δ-catenin的检测抗体、纳米量子点标记。所述试剂盒能够从病人尿液中用ELISA方法检测与前列腺癌成高度相关性的δ-catenin蛋白，而且ELISA方法成熟，敏感性和特异性较高，对病人是非侵袭性的，能够重复采取，病人乐于接受。纳米量子点(QD)标记法取样量小，将ELISA方法中所用的抗体与QD结合，能更灵敏地检测尿液中δ-catenin蛋白的变化，从而用于诊断前列腺癌。

主权项

δ‑catenin蛋白在制备用于检测或诊断前列腺癌的试剂盒中的应用，其特征在于，该试剂盒的检测步骤如下：步骤1)用碳酸盐或dPBS包被缓冲液将δ‑catenin吸附抗体稀释至蛋白质含量为1～100μg/ml，在每个聚苯乙烯板的反应孔中加100微升，4℃过夜，次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗5次，洗板机洗涤；其中，碳酸盐包被缓冲液通过1.59克的Na₂CO₃、2.93克的NaHCO₃，加蒸馏水至1000ml制备，dPBS包被缓冲液为Dulbecco’s PBS；其中，洗涤缓冲液通过0.2克的KH₂PO₄、2.9克的Na₂HPO₄·12H₂O、8.0克的NaCl、0.2克的KCl、0.5ml0.05％的Tween‑20，加蒸馏水至1000ml制备；步骤2)每孔加封闭缓冲液200微升，室温下孵育1小时后用洗板机洗涤；其中，封闭液通过2克的牛血清白蛋白，加洗涤缓冲液至100ml制备；步骤3)加入标准品、阴性对照和前列腺癌症尿液标本；每个标本尿液各加100微升，37℃温育2小时后洗板；其中，标准品为人δ‑catenin标准蛋白，阴性对照为正常健康成年男性尿液标本，前列腺癌症尿液标本为37例年龄50～80的前列腺癌病人经泌尿科超声初诊和病理确诊Gleason分级7～10；其中，尿液收集后在‑20度保存；步骤4)加入纳米量子点标记的抗人δ‑catenin抗体，其中，纳米量子点标记的抗人δ‑catenin抗体的制备方法为：采用Evident Technologies的Evitags纳米量子点水溶，用EDC(1‑ethyl‑3‑[3‑dimethylaminopropyl]carbodiimide)和sulfo‑NHS在纳米量子点表面形成活性，在多余的EDC 和 sulfo‑NHS用过滤器去除后，加入抗人δ‑catenin抗体与纳米量子点形成共价结合；步骤5)判定结果。