一种水貂阿留申病毒抗体ELISA快速检测试剂盒及其制备方法

摘要

本发明涉及一种水貂阿留申病毒抗体ELISA快速检测试剂盒及其制备方法，步骤包括：(1)阿留申病毒培养；(2)阿留申病毒纯化；(3)兔抗水貂二抗的制备及酶标二抗的制备；(4)快速检测试剂盒的制备。本发明可以快速、灵敏、准确的检测水貂阿留申病毒抗体，克服了国内检测水貂阿留申抗体主要以双流向电泳法和PCR法的问题。

主权项

一种水貂阿留申病毒抗体ELISA快速检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)阿留申病毒培养：将10日龄因阿留申病毒导致死亡的仔貂，取出睾丸和肾脏制备细胞悬液,细胞密度为1～5×10⁴个/ml，37℃培养，营养液采用DMEM培育基，按DMEM培育基的体积加入5％新生牛血清，细胞经4天长成单层后,弃去营养液,加入除菌的连续通过貂体的第三代反应毒，接毒量为1％，加入维持液，维持液采用不加血清的DMEM培养液，接毒后一周出现病变并收集病毒，冷冻冻融三次待用；(2)阿留申病毒纯化：称取凝胶干粉G‑20010‑12克，缓慢地倒入20倍凝胶体积的蒸馏水中,在室温条件下浸泡三小时或在沸水中浸泡4‑5小时，轻轻搅拌，在室温静止30分钟，将上层液体倾出，再用蒸馏水浮洗4次，然后装柱加样；收集时将每管洗脱液依次排列，逐份用SPA菌体(+)血清试剂作特异性测定，根据特异性和峰值收集，第一峰为纯化的阿留申病毒蛋白，第二峰为非特异蛋白；经sephadex‑G200分离后，将样品装入透析袋中、用聚乙二醇20000浓缩成要求的蛋白含量、透析、平衡、分装、4℃保存，即得纯化的病毒抗原。