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Un procedimiento de replicación de un virus seleccionado del grupo que consiste en adenovirus, hepadnavirus, virus herpes, ortomixovirus, papovavirus, paramixovirus, picornavirus, poxvirus, reovirus y retrovirus, en células madre derivadas de embriones aviares, en el que dichas células se establecen por un procedimiento que comprende las etapas siguientes: A) aislamiento, cultivo y expansión de células madre embrionarias aviares en un medio de cultivo completo que contiene todos los factores que permiten su crecimiento y en presencia de una capa alimentadora inactivada de fibroblastos de ratón y complementados con suero animal; B) subcultivo mediante modificación del medio de cultivo para obtener una retirada progresiva o total de dichos factores, de dicho suero y de dicha capa alimentadora; C) establecimiento de líneas de células aviares adherentes o no adherentes capaces de proliferar en un medio basal en la ausencia de factores de crecimiento exógenos, capa alimentadora inactivada y un nivel de 2% o menor de suero o sin suero, comprendiendo dicho procedimiento de replicación las etapas de: a) proliferación de dichas células obtenidas en la etapa C) en un recipiente de cultivo, en suspensión, en un medio sin suero N°1, en el que se deja que dichas células se agreguen entre sí para formar agrupaciones celulares durante al menos dicha etapa de proliferación, y en el que dichas agrupaciones celulares no se rompen por centrifugación y dichas células se subcultivan por dilución en un recipiente de cultivo mayor; b) infección de dichas células en agrupaciones celulares con el virus seleccionado cuando la densidad celular es de al menos 1,5 millones de células/ml; c) poco antes de la infección, simultáneamente a la infección, o poco después de la infección, adición al cultivo celular de medio sin suero N°2; y d) cultivo adicional de dichas células infectadas con el fin de permitir la replicación del virus; y e) opcionalmente, recogida de dicho virus. |
